色譜柱常見問題解答

柱壓升高 色譜柱入U濾片被流動相或樣品中顆粒堵住,。

樣品組分在濾片上沉淀堵住濾片。 卸下入口接頭的濾片,，使用1：1的硝酸溶液超聲清洗5min,，再用水、

甲醇清洗除去水份,。

樣品及流動相使用0．45μm濾膜除去微量雜質(zhì),。

使用流動相作溶劑配制樣品。  

新柱柱效低 柱外死體積大,。

樣品在流動相中溶解不好,，影響傳質(zhì)過程。 更換連接管,，重新連接色譜柱,，降低死體積。

使用合適的流動相或使用流動相溶解樣品,。  

舊色譜柱柱效低,，分離不好，柱入口床層塌陷,。 填料被流動相溶蝕而流失,。 用同型填料填補柱效可部分恢復(fù)。

對硅膠質(zhì)填料,，流動相PH值在2—7范圍內(nèi),，否則可能被溶蝕,。  

舊色譜柱柱效低分離不好,，有時出現(xiàn)雙峰。 入門填料被污染變質(zhì)所致,。 用強溶劑沖洗,。

刮除被污染的床層，用同型的填料填補柱效可部分恢復(fù),。

污染嚴重,，則廢棄或重新填裝。  

新柱接到儀器上后,，柱頭漏液,。 柱接頭與儀器之間連接管的壓環(huán)變形量不夠,。 用扳手順時針方向擰緊1／4圈直到不漏液為止。  

新柱接到儀器上后,，啟動儀器沒有柱壓降,。 柱放置時間過長柱內(nèi)充裝的液體己揮發(fā)干。 繼續(xù)開泵,，用流動相將柱內(nèi)氣體置換掉,。  

新柱接到儀器上后，檢測器出口不斷有小氣泡出

現(xiàn),。 ①同上,。

② 流動相脫氣不徹底特別是MeOH／H20體系由于氫鍵作用很容易出現(xiàn)氣泡。 ①同上,。

②配好流動相后一定要進行脫氣處理,。  

新柱接到儀器上后柱壓降不斷增加，甚至超過儀器的耐壓限,。 柱入口濾片被固體顆粒堵塞或被毒

菌堵塞,。 更換或清洗柱入口濾片；用0．45μm過濾膜過濾流動相除去微小顆粒物,。  

進樣次數(shù)增加柱壓降逐漸增加,。 ①樣品中含有不溶于流動相的微小顆粒物。

②樣品在流動相中析出微小結(jié)晶,。 ①用0．45μm過濾膜過濾樣品,。

②推薦使用流動相溶解樣品。  

使用—段時間后,，柱效下降,，分離不好。 ①柱填料被流動相溶解而流失,。

②柱填料被樣品雜質(zhì)污染,。 ①推薦使用予柱。如柱床層塌陷,，用相同型號填料填補,。

②推薦使用保護柱或用強溶劑沖洗色譜柱除去污染雜質(zhì)。  

柱使用一段時間后,，柱效下降出現(xiàn)雙峰,。 柱入口床層被污染使柱填料變質(zhì)。 用強溶劑沖洗除去雜質(zhì),。  

柱使用—段時間后,，柱效下降，出現(xiàn)峰拖尾,。 柱入口床層被污染,。 用強溶劑沖洗20-30ml,，若效果不明顯應(yīng)廢棄。  

進樣量增大與峰面積增加不成正比．即進樣量與峰面積不是線性關(guān)系,。 樣品在流動相中的溶解度小,，只有部分樣品被流動相沖如色譜柱中而另一部分則沉積在柱人口端。 ①用流動相溶解樣品,。

②樣品的濃度不宜太大,。

④進樣量不宜過大。  

使用緩沖液作流動相時,，柱壓降升高很快,。 霉菌生長所致。 ①在流動相中加入有毒物質(zhì)或加疊氯化鈉防止霉菌生長,。

②實驗結(jié)束后先用純水后用MeOH各沖洗20-30ml后關(guān)機,。  

用5μm顆粒填料柱時， 以MeOH／H20作流動相柱壓較高,。 MeOH與水之間由于氫鍵作用黏度增大,。 可用乙腈／水體系使柱壓降低，分離效率更好,。  

長時間放置的色譜柱,，出現(xiàn)雙峰。 柱床層出現(xiàn)干裂,。 柱放置時,，最好使用相應(yīng)的溶劑充填好，防止受大的機械震動,，如床層干裂應(yīng)廢棄掉,。  

流動相洗滌強度由弱漸強時出現(xiàn)很多雜質(zhì)峰。 強溶劑將弱溶劑洗不出的雜質(zhì)沖出來,。 不影響柱的性能,。  

柱使用一段時間后保留值逐漸縮短。 柱中固定相流失所致,。 ①更換色譜柱,。

②檢查所用的色譜條件是否合適。  

在U V色譜圖中,，靠近死時間處出現(xiàn)負峰,。 ①進樣時壓力波動所致,。

②樣品溶劑比流動相的UV吸收值低,。 ①采用閥進樣。

②用流動相溶解樣品,。