HPLC和LC/MS 緩沖液選擇指南：總結

· 緩沖液可用于RP-HPLC分離,，以控制離子化化合物的保留,。通常,，我們需要抑制分析物發(fā)生電離，以最大化樣品保留,。這意味著,，不管是
對于酸性或堿性溶劑,，其流動相的pH值（理想情況下）應至少低于或高于樣品pKa值2個pH單位,。

· 為了實現(xiàn)最佳的緩沖效果,，緩沖液的pKa值應在±1個pH單位內。

鑒于樣品和緩沖液的這些特性,，應根據(jù)表1和表2,，謹慎選擇緩沖液,。

· 對于LC-UV分析,，磷酸鹽和醋酸鹽緩沖液最為常用；醋酸鹽 - 磷酸鹽組合使用,，可提供2<pH<8的范圍,，這涵蓋了大多數(shù)RP-HPLC色譜柱的穩(wěn)定性。

· 對于LC-MS應用,，緩沖液必須易揮發(fā),，所以緩沖液的選擇更加有限。
甲酸鹽,、醋酸鹽,、氨和碳酸氫鹽（表1和2）的各種組合可廣泛適用于LC-MS。

· 對于許多LC-UV和LC-MS方法,，較低的pH值比緩沖效果更加重要,，因此可以使用0.1％磷酸（UV）或甲酸（MS）酸來滿足這一要求。

鑒于目前高純度色譜柱的低硅烷醇活性,，以及低濃度的分析物分子,，最終流動相只要含有5-10mM的緩沖液,，就能滿足大多數(shù)應用的需求。

· 如果通過混合的方式制備流動相（A容器和B容器分別裝有緩沖液和有機溶劑）,，應將緩沖液濃度控制在25mM以下,，可避免緩沖液和有機溶劑混合時產生沉淀。

一些HPLC系統(tǒng)在混合過程中能比其他系統(tǒng)更有效的避免沉淀的產生,。如果需要測量沉淀,，可將緩沖液逐滴添加到有機溶劑的試管中（反之亦然）。如果觀察到沉淀,，則應在混合緩沖液和有機溶劑之前稀釋緩沖液,。

· 最后，應注意避免沾染污染物,，制備后應過濾緩沖液,；如果不使用系統(tǒng)，請勿在系統(tǒng)中殘留緩沖液,。

---

參考文獻
1. D.D.Perrin & B. Dempsey, Buffers for pH and Metal Ion Control,
John Wiley, New York (1974).
2. A.P.Schellinger & P.W.Carr, LCGC 22 (2004) 544-548.
3. L. R. Snyder, J. J. Kirkland, & J. L. Glajch, Practical HPLC Method
Development, 2nd ed., Wiley-Interscience, New York (1997).
4. http://www.bi.umist.ac.uk/users/mjfrbn/buffers/Makebuf.asp
5. G.W.Tindall, LCGC 22 (2002) 1028-1032.
6. G.W.Tindall, LCGC 22 (2002) 1114-1118.
7. G.W.Tindall, LCGC 23 (2003) 28-32.
8. M.D. Nelson & J.W.Carr, LCGC 16 (1998) 992-996.

---

作者：

John Dolan是LCGC和LCGC歐洲的“LC故障排除”專欄撰稿人,。

在250多期的專欄文章之外，Dolan博士還發(fā)表了100多篇HPLC相關的論文,。

他的研究領域涵蓋方法開發(fā),、色譜柱表征和梯度洗脫等方面。

他還從事與HPLC相關的儀器設計,、軟件編寫,、合同實驗室管理以及教授HPLC技術等工作。

目前,，John是LCResources公司的負責人,。

LC Resources是一家致力于色譜技術培訓和色譜問題咨詢的公司。

他在本指南中與我們分享了與緩沖液使用相關的專業(yè)知識,。

有關John課程的更多信息,，請訪問LC Resources網(wǎng)站：www.LCResources.com