高效液相色譜(HPLC)是20世紀60年代后期發(fā)展起來的分離分析技術,，是現代分離測定的重要手段,。問世以來,，因其具有分離效能高,、分析速度快,、檢測靈敏度好,、能分析高沸點但不能氣化的熱不穩(wěn)定生理活性 物質的特點而被廣泛應用于生物化學,、藥物及臨床分析,。

高效液相色譜是用高壓輸液泵將具有不同極性的 單一溶劑或不同比例的混合溶劑,，緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱,，經進樣閥注入待測樣品，由流動相帶入柱內,，在柱內各成分被分離后依次進入檢測器,，色譜信號由記錄儀、積分儀或色譜工作站記錄,。

色譜柱是高效液相色譜的心臟,，在高效液相色譜儀的使用中，保持色譜柱的柱效,、容量和滲透粉性,，延長 柱子的使用壽命非常重要。因此對高效液相色譜柱的維護是關鍵,。

1色譜柱的構造

色譜柱由柱管,、壓帽、卡套(密封環(huán)),、篩板(濾片),、接頭、螺絲等組成,。柱管多用不銹鋼制成,，壓力不高于70㎏/㎝2時,，也可采用厚壁玻璃或石英管，管內壁要求有很高的光潔度,。

為提高柱效,，減小管壁效應，不銹鋼柱內壁多經過拋光,。還有使用熔融硅或玻璃襯里的,，用于細管柱。色譜柱兩端的柱接頭內裝有篩板,，是燒結不銹鋼或欽合金,，孔徑0.2-20 μm(5-10μm)，取決于填料粒度,，目的是防止填料漏出,。

色譜柱按用途可分為分析型和制備型兩類，尺寸規(guī)格也不同:

(I)常規(guī)分析柱(常量柱),，內徑2-5mm(常用4.6mm,，國內有4mm和5mm )，柱長10-30cm ;

(2)窄徑柱,，又稱細管徑柱,、半微柱，內徑1 -2mm ,柱長10-20cm;

(3)毛細管柱(又稱微柱),，內徑0.2-0.5mm;

(4)半制備柱,，內徑>5mm;

(5)實驗室制備柱，內徑20-40rnm,，柱長10-30cm;

(6)生產制備柱內徑可達幾十厘米,。柱內徑一般是根據柱長、填料粒徑和折合流速來確定,，目的是為了避免管壁效應,。

2色譜柱的使用和維護

在日常分離分析工作中，色譜柱的正確使用和維護十分重要,，色譜柱使用是否得當,，直接影響色譜柱的壽命，稍有不慎就會降低柱效,、縮短使用壽命甚至損壞,。在色譜操作過程中，需要注意下列問題,，以維護色譜柱,。

(1)柱子在裝卸、更換時,，動作要輕,，接頭擰緊要適度,。必須防止較強的機械振動，以免柱床產生空隙,。

(2)如果儀器用來做常規(guī)分析,，樣品種類有限，但分析次數多,，則不妨為每一類常規(guī)分析配置一根專用柱,，這樣有助于延長柱子的壽命。

(3)避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動,。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內填料,，因此在調節(jié)流速時應該緩慢進行，在閥進樣時閥的轉動不能過緩,。

(4)應逐漸改變溶劑的組成,，特別是反相色譜中，不應直接從有機溶劑改變?yōu)槿渴撬?，反之亦然?

(5)如使用柱溫控制裝置時,，應注意在通人流動相后才能升溫。

(6)一般說來色譜柱不能反沖,，只有生產者指明該柱可以反沖時,，才可以反沖除去留在柱頭的雜質。否則反沖會迅速降低柱效,。

(7)選擇使用適宜的流動相,，以避免固定相被破壞。有時可以在進樣器前面連接一個預柱,，分析柱是鍵合硅膠時,，預柱為硅膠，可使流動相在進入分析柱之前預先被硅膠“飽和”,，避免分析柱中的硅膠基質被溶解。

(8)避免將基質復雜的樣品尤其是生物樣品直接注人柱內,，需要對樣品進行預處理或者在進樣器和色譜柱之間連接一個保護柱,。保護柱一般是填有相似固定相的短柱。保護柱可以而且應該經常更換,。

(9)經常用強溶劑沖洗色譜柱,，清除保留在柱內的雜質。在進行清洗時,，對流路系統(tǒng)中流動相的置換應以相混溶的溶劑逐漸過渡,，每種流動相的體積應是柱體積的20倍左右，即常規(guī)分析需要50-75mL,。

(10)保存色譜柱時應將柱內充滿乙腈或甲醇,，柱接頭要擰緊,，防止溶劑揮發(fā)干燥。絕對禁止將緩沖溶液留在柱內靜置過夜或更長時間,。

(11)色譜柱使用過程中,，如果壓力升高，一種可能是燒結濾片被堵塞,，這時應更換濾片或將其取出進行清洗;另一種可能是大分子進人柱內,，使柱頭被污染;如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現塌陷,，死體積增大,。

(12)在完成分離分析工作之后，不應立即停機,，需及時對色譜分析系統(tǒng)進行沖洗,，一般0.5h以上，以除去色譜柱內的雜質,。