液相色譜系統(tǒng)的許多問題都可以在譜圖上反映出來(lái),。
其中有一些問題可以通過改變?cè)O(shè)備參數(shù)得到解決,;而其他的問題必須通過修改操作程序來(lái)解決。
對(duì)于色譜柱和流動(dòng)相的正確選擇是得到好的色譜圖的關(guān)鍵所在,。
A.峰拖尾
原因 |
解決辦法 |
1.篩板阻塞,; |
1.a(chǎn).反沖色譜柱,; b.更換進(jìn)口篩板,; c.更換色譜柱; |
2.色譜柱塌陷,; |
2. 填充色譜柱,; |
3.干擾峰; |
3. a.使用更長(zhǎng)的色譜柱,; b.改變流動(dòng)相或更換色譜柱,; |
4.流動(dòng)相pH選擇錯(cuò)誤; |
4.調(diào)整pH值,,對(duì)于堿性化合物,,低pH值更有利于得到對(duì)稱峰; |
5.樣品與填料表面的溶化點(diǎn)發(fā)生反應(yīng),; |
5.a.加入離子對(duì)試劑或堿性揮發(fā)性修飾劑,。b.更改色譜柱。 |
原因 |
解決辦法 |
1.柱溫低,; |
1.升高柱溫,; |
2.樣品溶劑選擇不恰當(dāng); |
2.使用流動(dòng)相作為樣品溶劑,; |
3.樣品過載,; |
3.降低樣品含量; |
4.色譜柱損壞,; |
4.見A1,、A2; |
原因 |
解決辦法 |
1.保護(hù)柱或分析柱污染,; |
1.取下保護(hù)柱再進(jìn)行分析;如果必要更換保護(hù)柱,;如果分析柱阻塞,,拆下來(lái)清洗;如果問題仍然存在,,可能是柱子被強(qiáng)保留物質(zhì)污染,,運(yùn)用適當(dāng)?shù)脑偕胧蝗绻麊栴}仍然存在,,入口可能被阻塞,,更換篩板或更換色譜柱。 |
2.樣品溶劑不溶于流動(dòng)相,; |
2.改變樣品溶劑,;如果可能采取流動(dòng)相作為樣品溶劑; |
原因 |
解決辦法 |
1.樣品過載,; |
1.減少樣品載量,; |
原因 |
解決辦法 |
1.樣品溶劑選擇不恰當(dāng),; |
1. a.減少進(jìn)樣體積; b.運(yùn)用低極性樣品溶劑,; |
原因 |
解決辦法 |
1.柱外效應(yīng),; |
1. a.調(diào)整系統(tǒng)連接(使用更短、內(nèi)徑更小的管路),; b.使用小體積的流通池,; |
原因 |
解決辦法 |
1.二級(jí)保留效應(yīng),,反相模式,; |
1. a.加入三乙胺(或堿性樣品); b.加入乙酸(或酸性樣品),; c.加入鹽或緩沖劑(或離子化樣品),; d.更換一支柱子; |
2.二級(jí)保留效應(yīng),,正相模式,; |
2. a.加入三乙胺(或堿性樣品); b.加入乙酸(或酸性樣品),; c.加入水(或多官能團(tuán)化合物),; d.試用另一種方法; |
3.二級(jí)保留效應(yīng),,離子對(duì),; |
3.加入三乙胺(或堿性樣品); |
原因 |
解決辦法 |
1.緩沖不合適,; |
a.使用濃度50~100mM的緩沖液,; b.使用P ka等于流動(dòng)相pH值的緩沖液; |
原因 |
解決辦法 |
1.樣品中有其他組份,; |
1.正常,; |
2.前一次進(jìn)樣的洗脫峰; |
2. a.增加運(yùn)行時(shí)間或梯度斜率,; b.提高流速,; |
3.空位或鬼峰; |
3. a.檢查流動(dòng)相是否純凈,; b.使用流動(dòng)相作為樣品溶劑,; c.減少進(jìn)樣體積; |
原因 |
解決辦法 |
1.溫控不當(dāng),; |
1.調(diào)好柱溫,; |
2.流動(dòng)相組分變化 |
2.防止變化(蒸發(fā)、反應(yīng)等); |
3.色譜柱沒有平衡,; |
3.在每一次運(yùn)行之前給予足夠的時(shí)間平衡色譜柱,; |
原因 |
解決辦法 |
1.流速變化; |
1.重新設(shè)定流速,; |
2.泵中有氣泡,; |
2.從泵中除去氣泡; |
3.流動(dòng)相選擇不恰當(dāng),; |
3. a.更換合適的流動(dòng)相,; b.選擇合適的混合流動(dòng)相; |
原因 |
解決辦法 |
1.柱溫波動(dòng),;(即使很小的溫度變化都會(huì)引起基線波動(dòng),;通常影響示差檢測(cè)器、電導(dǎo)檢測(cè)器,、較低靈敏度的紫外檢測(cè)器或其它光電類檢測(cè)器,;) |
1.控制好柱子和流動(dòng)相的溫度,在檢測(cè)器之前使用熱交換器,; |
2.流動(dòng)相不均勻,;(流動(dòng)相條件變化引起的基線漂移大于溫度導(dǎo)致的漂移) |
2.使用HPLC級(jí)的溶劑,高純度的鹽和添加劑,;流動(dòng)相在使用前進(jìn)行脫氣,,使用中使用氦氣; |
3.流通池被污染或有氣體,; |
3.用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池,;如有需要,可以用1N的硝酸,。(不要用鹽酸) |
4.檢測(cè)器出口阻塞,;(高壓造成流通池窗口破裂,產(chǎn)生噪音基線) |
4.取出阻塞物或更換管子,;參考檢測(cè)器手冊(cè)更換流通池窗,; |
5.流動(dòng)相配比不當(dāng)或流速變化; |
5.更改配比或流速,;為避免這個(gè)問題可定期檢查流動(dòng)相組成及流速; |
6.柱平衡慢,,特別是流動(dòng)相發(fā)生變化時(shí),; |
6.用中等強(qiáng)度的溶劑進(jìn)行沖洗,更改流動(dòng)相時(shí),,在分析前用10~20倍體積的新流動(dòng)相對(duì)柱子進(jìn)行沖洗,; |
7.流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成; |
7.檢查流動(dòng)相的組成,;使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級(jí)的溶劑,; |
8.樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì)(高K’值)以饅頭峰樣被洗脫出,從而表現(xiàn)出一個(gè)逐步升高的基線,。 |
8.使用保護(hù)柱,,如有必要,在進(jìn)樣之間或在分析過程中,,定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子,。 |
9.使用循環(huán)溶劑,但檢測(cè)器未調(diào)整,。 |
9.重新設(shè)定基線,;當(dāng)檢測(cè)器動(dòng)力學(xué)范圍發(fā)生變化時(shí),使用新的流動(dòng)相,; |
10.檢測(cè)器沒有設(shè)定在最大吸收波長(zhǎng)處,; |
10.將波長(zhǎng)調(diào)整至最大吸收波長(zhǎng)處; |
原因 |
解決辦法 |
1.在流動(dòng)相,、檢測(cè)器或泵中有空氣,; |
1.流動(dòng)相脫氣。沖洗系統(tǒng)以除去檢測(cè)器或泵中的空氣,; |
2.漏液 |
2.見第三部分,;檢查管路接頭是否松動(dòng),泵是否漏液,,是否有鹽析出和不正常的噪音,。如有必要,更換泵密封,。 |
3.流動(dòng)相混合不完全 |
3.用手搖動(dòng)使混合均勻或使用低粘度的溶劑 |
4.溫度影響(柱溫過高,,檢測(cè)器未加熱) |
4.減少差異或加上熱交換器 |
5.在同一條線上有其他電子設(shè)備 |
5.斷開LC、檢測(cè)器和記錄儀,,檢查干擾是否來(lái)自于外部,,加以更正。 |
6.泵振動(dòng) |
6.在系統(tǒng)中加入脈沖阻尼器 |
原因 |
解決辦法 |
1.漏液 |
1.見第三部分,。檢查接頭是否松動(dòng),,泵是否漏液,是否有鹽析出和不正常的噪音,。如有必要,,更換密封。檢查流通池是否漏液,。 |
2.流動(dòng)相污染,、變質(zhì)或由低質(zhì)溶劑配成 |
2.檢查流動(dòng)相的組成,。 |
3.流動(dòng)相各溶劑不相溶 |
3.選擇互溶的流動(dòng)相 |
4.檢測(cè)器/記錄儀電子元件的問題 |
4.斷開檢測(cè)器和記錄儀的電源,檢查并更正,。 |
5.系統(tǒng)內(nèi)有氣泡 |
5.用強(qiáng)極性溶液清洗系統(tǒng) |
6.檢測(cè)器內(nèi)有氣泡 |
6.清洗檢測(cè)器,,在檢測(cè)器后面安裝背景壓力調(diào)節(jié)器 |
7、流通池污染(即使是極少的污染物也會(huì)產(chǎn)生噪音,。) |
7.用1N的硝酸(不能用磷酸)清洗流通池 |
8.檢測(cè)器燈能量不足 |
8.更換燈 |
9.色譜柱填料流失或阻塞 |
9.更換色譜柱 |
10.流動(dòng)相混合不均勻或混合器工作不正常 |
10.維修或更換混合器,,在流動(dòng)相不走梯度時(shí),建議不使用泵的混合裝置 |
原因 |
解決辦法 |
1.流動(dòng)相組成變化 |
1.重新制備新的流動(dòng)相 |
2.流動(dòng)相流速太低 |
2.調(diào)節(jié)流速 |
3.漏液(特別是在柱子和檢測(cè)器之間) |
3.見section 3,。檢查接頭是否松動(dòng),、泵是否漏液、是否有鹽析出以及不正常的噪音,。如果必要更換密封,。 |
4.檢測(cè)器設(shè)定不正確 |
4.調(diào)整設(shè)定 |
5.柱外效應(yīng)影響 a.柱子過載 b.檢測(cè)器對(duì)反應(yīng)時(shí)間或池體積響應(yīng)過大 c.柱子與檢測(cè)器之間的管路太長(zhǎng)或管路內(nèi)徑太大 d.記錄儀響應(yīng)時(shí)間太長(zhǎng) |
5. a.小體積進(jìn)樣(例如:10μl而不是100μl)以1:10或1:100的比例稀釋樣品 b.減少響應(yīng)時(shí)間或使用更小的流通池 c.使用內(nèi)徑為0.007~0.01的短管路 d.減少響應(yīng)時(shí)間 |
6.緩沖液濃度太低 |
6.增加濃度 |
7.保護(hù)柱污染或失效 |
7.更換保護(hù)柱 |
8.色譜柱污染或失效,塔板數(shù)較低 |
8.更換同樣類型的色譜柱,。如果新柱子可以提供對(duì)稱的色譜峰,,則用強(qiáng)溶劑沖洗舊柱子。 |
9.柱入口塌陷 |
9.打開柱入口,,填補(bǔ)塌陷或更換柱子 |
10.呈現(xiàn)兩個(gè)或多個(gè)未被完全分離的物質(zhì)的峰 |
10.選擇其它類型的色譜柱以改善分離效果 |
11.柱溫過低 |
11.提高柱溫,。除非特殊情況,溫度不宜超過75℃ |
12.檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)太大 |
12.使用較小的時(shí)間常數(shù) |
原因 |
解決辦法 |
1.流動(dòng)相污染或變質(zhì)(引起保留時(shí)間變化) |
1.重新配置流動(dòng)相 |
2.保護(hù)柱或分析柱阻塞 |
2.去掉保護(hù)柱進(jìn)行分析,。如果必要?jiǎng)t更換保護(hù)柱,。如果分析柱阻塞,可進(jìn)行反沖,。如果問題仍然存在色譜柱可能被強(qiáng)保留的污染物損壞,,建議使用恰當(dāng)?shù)脑偕绦颉H绻麊栴}仍然存在,,進(jìn)口可能阻塞了,,更換入口處的篩板或更換色譜柱。 |
原因 |
解決辦法 |
1.檢測(cè)器衰減設(shè)定過高 |
1.減少衰減的設(shè)定 |
2.檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)設(shè)定太大 |
2.設(shè)定較小的時(shí)間常數(shù) |
3.進(jìn)樣量太少 |
3.增大進(jìn)樣量 |
4.記錄儀連接不當(dāng) |
4.使用正確的連接 |
原因 |
解決辦法 |
1.檢測(cè)器衰減設(shè)定過低 |
1.采取較大的衰減 |
2.進(jìn)樣過多 |
2.減少進(jìn)樣量 |
3.記錄儀連接不正確 |
3.正確連接記錄儀 |
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