1．加流路過濾器和保護柱

流路過濾器緊靠進樣閥后面,，位于分析柱前,。

0.5μm燒結(jié)不銹鋼片夾在死體積很小的套子中，擋住來源于樣品和進樣閥墊圈的微粒入柱,。

因為每個樣品都過濾既費事又帶來誤差,，樣品量少過濾更困難，因此流路上裝過濾器是比較省事的辦法,。

也可以在流路加上保護柱,，放在流路過濾器和分析柱之間，或者代替流路過濾器,。

保護柱的使命是收集阻塞柱進口的來自樣品的化學“垃圾”,。

這程垃圾最終隱藏低柱效能。保護柱應該是小體積,，用分析柱的同種填料填裝,。

保護柱使用得當,，對分離無影響，好像未裝保護柱一樣,。有些廠商的商品將保護柱都是用短柱,、不超過3cm長,，內(nèi)徑2～3mm,，用較大粒度的填粒（15～20μm）干法填裝，會使分析柱的效能有所降低,。

2．避免高壓沖擊

一般色譜柱都能經(jīng)得起高壓,，但經(jīng)不起突然變化的高壓沖擊。引起高壓突然沖擊,，主要是因樣品閥的緩慢轉(zhuǎn)動,、泵起動快，柱切換操作等,。

前面已討論過,，轉(zhuǎn)動六通進樣閥時從泵到柱的液流會瞬時切斷。

在閥的泵側(cè)壓力升高,，在閥的柱側(cè)壓力降低（變化超過20%）,。

閥轉(zhuǎn)到底后壓力突然沖擊一下恢復正常，手動進樣閥的變化不大,，自動進樣閥比較慢,，可能造成壓力沖擊，可用氦氣代替空氣驅(qū)動進樣閥,，因氨壓縮系數(shù)小,。

另外泵起動不應過快，可分步操作,。

如用3ml/min流速,，先從1mL/min到2mL/min，然后再3ml/min,，每個間隔應大于20s,。

色譜柱切換技術的應用也很廣泛，切換過程中在色譜柱的入口處壓力在零到很大數(shù)字之間變化,，會很快使柱報廢,。

3．分離條件

多數(shù)色譜柱有很寬的試驗條件范圍，但具體應用又受到限制,，主要是pH值,、柱溫和流動相的選擇。

硅膠為基質(zhì)的鍵合相要求pH在2.5～7之間,，極端pH的流動相能“溶解”硅膠,，使鍵合相流失,，結(jié)果非堿性組分峰變寬。

如果一定要用高或低pH的流動相,，可加預柱（飽和柱）,。

預柱裝在泵和進樣閥之間，用分析柱相同的填料填裝,，或者用普通硅膠,。

硅膠飽和了流動相，減少了分析柱填料的損失,。

預柱不要求柱效高,，用價格低的一般硅膠疏松地填裝，按期檢查硅膠的溶解情況,。

用預柱也有不利的影響,，即新流動相難以平衡，保留時間不穩(wěn)定或穩(wěn)定慢,。

使用了預柱一定要加流路過濾器,，以防止硅膠微粒引起的麻煩。

以硅膠為基質(zhì)的柱和陰離子交換柱超過60℃后,，會增加對流動相中化學物質(zhì)的吸附,。

在高溫下用小顆粒柱引起柱床塌陷，降低柱效,，改變峰形,。

在4℃以上使用3μm柱，70℃以上使用5μm柱,，會使N值降低50%,。

有些流動相中的溶劑不能用于某些柱，如小顆粒的聚苯乙烯填料不能用于非水的排阻色譜,。

另一方面,，有些柱與某些溶劑（如四氫呋喃）一旦達到平衡，不要隨意改用其它溶劑,。有關這些特殊填料,，可以參見有關資料。

水溶性流動相會引起微生物生長而造成阻塞柱,。

菲羅門色譜柱應存放在純有機溶劑或加了50%有機溶劑的水中,。

凝膠柱可存放在水溶性緩沖液中，同時加0.01%疊氮鈉以防止微生物的生長,。