1．加流路過濾器和保護(hù)柱

流路過濾器緊靠進(jìn)樣閥后面,，位于分析柱前,。

0.5μm燒結(jié)不銹鋼片夾在死體積很小的套子中，擋住來(lái)源于樣品和進(jìn)樣閥墊圈的微粒入柱,。

因?yàn)槊總€(gè)樣品都過濾既費(fèi)事又帶來(lái)誤差,，樣品量少過濾更困難，因此流路上裝過濾器是比較省事的辦法,。

也可以在流路加上保護(hù)柱,，放在流路過濾器和分析柱之間，或者代替流路過濾器,。

保護(hù)柱的使命是收集阻塞柱進(jìn)口的來(lái)自樣品的化學(xué)“垃圾”,。

這程垃圾最終隱藏低柱效能。保護(hù)柱應(yīng)該是小體積,，用分析柱的同種填料填裝,。

保護(hù)柱使用得當(dāng)，對(duì)分離無(wú)影響,，好像未裝保護(hù)柱一樣,。有些廠商的商品將保護(hù)柱都是用短柱、不超過3cm長(zhǎng),，內(nèi)徑2～3mm,，用較大粒度的填粒（15～20μm）干法填裝，會(huì)使分析柱的效能有所降低,。

2．避免高壓沖擊

一般色譜柱都能經(jīng)得起高壓,，但經(jīng)不起突然變化的高壓沖擊。引起高壓突然沖擊,，主要是因樣品閥的緩慢轉(zhuǎn)動(dòng),、泵起動(dòng)快，柱切換操作等,。

前面已討論過,，轉(zhuǎn)動(dòng)六通進(jìn)樣閥時(shí)從泵到柱的液流會(huì)瞬時(shí)切斷,。

在閥的泵側(cè)壓力升高，在閥的柱側(cè)壓力降低（變化超過20%）,。

閥轉(zhuǎn)到底后壓力突然沖擊一下恢復(fù)正常,，手動(dòng)進(jìn)樣閥的變化不大，自動(dòng)進(jìn)樣閥比較慢,，可能造成壓力沖擊,，可用氦氣代替空氣驅(qū)動(dòng)進(jìn)樣閥，因氨壓縮系數(shù)小,。

另外泵起動(dòng)不應(yīng)過快,，可分步操作。

如用3ml/min流速,，先從1mL/min到2mL/min,，然后再3ml/min，每個(gè)間隔應(yīng)大于20s,。

色譜柱切換技術(shù)的應(yīng)用也很廣泛,，切換過程中在色譜柱的入口處壓力在零到很大數(shù)字之間變化，會(huì)很快使柱報(bào)廢,。

3．分離條件

多數(shù)色譜柱有很寬的試驗(yàn)條件范圍,，但具體應(yīng)用又受到限制，主要是pH值,、柱溫和流動(dòng)相的選擇,。

硅膠為基質(zhì)的鍵合相要求pH在2.5～7之間，極端pH的流動(dòng)相能“溶解”硅膠,，使鍵合相流失,，結(jié)果非堿性組分峰變寬。

如果一定要用高或低pH的流動(dòng)相,，可加預(yù)柱（飽和柱）,。

預(yù)柱裝在泵和進(jìn)樣閥之間，用分析柱相同的填料填裝,，或者用普通硅膠,。

硅膠飽和了流動(dòng)相，減少了分析柱填料的損失,。

預(yù)柱不要求柱效高,，用價(jià)格低的一般硅膠疏松地填裝，按期檢查硅膠的溶解情況,。

用預(yù)柱也有不利的影響，即新流動(dòng)相難以平衡,，保留時(shí)間不穩(wěn)定或穩(wěn)定慢,。

使用了預(yù)柱一定要加流路過濾器,，以防止硅膠微粒引起的麻煩。

以硅膠為基質(zhì)的柱和陰離子交換柱超過60℃后,，會(huì)增加對(duì)流動(dòng)相中化學(xué)物質(zhì)的吸附,。

在高溫下用小顆粒柱引起柱床塌陷，降低柱效,，改變峰形,。

在4℃以上使用3μm柱，70℃以上使用5μm柱,，會(huì)使N值降低50%,。

有些流動(dòng)相中的溶劑不能用于某些柱，如小顆粒的聚苯乙烯填料不能用于非水的排阻色譜,。

另一方面,，有些柱與某些溶劑（如四氫呋喃）一旦達(dá)到平衡，不要隨意改用其它溶劑,。有關(guān)這些特殊填料,，可以參見有關(guān)資料。

水溶性流動(dòng)相會(huì)引起微生物生長(zhǎng)而造成阻塞柱,。

菲羅門色譜柱應(yīng)存放在純有機(jī)溶劑或加了50%有機(jī)溶劑的水中,。

凝膠柱可存放在水溶性緩沖液中，同時(shí)加0.01%疊氮鈉以防止微生物的生長(zhǎng),。