液相色譜對(duì)于多數(shù)人來(lái)說(shuō)都是很好上手的儀器了,，但是就算是用過(guò)幾年,、經(jīng)驗(yàn)豐富的分析員都會(huì)習(xí)慣于一些錯(cuò)誤的操作，經(jīng)常導(dǎo)致一些儀器故障,。
方便快捷的分析過(guò)程固然重要,，但是為了多做樣品而忽略了一些必不可少的步驟,，往往得不償失。
哪些操作不能做,？哪些懶兒不能偷,？那些小概率的故障師傅沒(méi)教怎么辦？液相使用過(guò)程中有哪四大關(guān)鍵因素要注意,？
流動(dòng)相不過(guò)濾,。
因?yàn)閴m埃或其它任何雜質(zhì)微粒都會(huì)磨損柱塞,、密封環(huán),、缸體和單向閥，因此應(yīng)預(yù)先除去流動(dòng)相中的任何固體微粒,。
流動(dòng)相在玻璃容器內(nèi)蒸餾,，而常用的方法是濾過(guò)，可采用Millipore濾膜（0.2μm或0.45μm）等濾器。泵的入口都應(yīng)連接砂濾棒（或片）,。
輸液泵的濾器應(yīng)經(jīng)常清洗或更換,。
使用后沒(méi)有及時(shí)清洗泵
流動(dòng)相不應(yīng)含有任何腐蝕性物質(zhì)，含有緩沖液的流動(dòng)相不應(yīng)保留在泵內(nèi),，尤其是在停泵過(guò)夜或更長(zhǎng)時(shí)間的情況下,。
如果將含緩沖液的流動(dòng)相留在泵內(nèi)，由于蒸發(fā)或泄漏,，甚至只是由于溶液的靜置,，就可能析出鹽的微細(xì)晶體，這些晶體將和上述固體微粒一樣損壞密封環(huán)和柱塞等,。
因此,，必須泵入純水將泵充分清洗后，再換成適合于色譜柱保存和有利于泵維護(hù)的溶劑（對(duì)于反相鍵合硅膠固定相,，可以是甲醇或甲醇-水）,。
流動(dòng)相走空。
泵工作時(shí)要留心防止溶劑瓶?jī)?nèi)的流動(dòng)相被用完,，否則空泵運(yùn)轉(zhuǎn)也會(huì)磨損柱塞,、缸體或密封環(huán)，最終產(chǎn)生漏液,。
沒(méi)有流動(dòng)相流出,，又無(wú)壓力指示怎么辦？
可能是泵內(nèi)有大量氣體,，這時(shí)可打開(kāi)泄壓閥,，使泵在較大流量（如5ml/min）下運(yùn)轉(zhuǎn)，將氣泡排盡,，也可用一個(gè)50ml針筒在泵出口處幫助抽出氣體,。另一個(gè)可能原因是密封環(huán)磨損，需更換,。
壓力和流量不穩(wěn)了,？
原因可能是氣泡，需要排除,；或者是單向閥內(nèi)有異物,，可卸下單向閥，浸入丙酮內(nèi)超聲清洗,。
有時(shí)可能是砂濾棒內(nèi)有氣泡,，或被鹽的微細(xì)晶粒或滋生的微生物部分堵塞,，這時(shí),，可卸下砂濾棒浸入流動(dòng)相內(nèi)超聲除氣泡,，或?qū)⑸盀V棒浸入稀酸（如4mol/L硝酸）內(nèi)迅速除去微生物，或?qū)Ⅺ}溶解,，再立即清洗,。
壓力為啥過(guò)高或過(guò)低？
可能是是管路被堵塞,，需要清除和清洗,。壓力降低的原因則可能是管路有泄漏。檢查堵塞或泄漏時(shí)應(yīng)逐段進(jìn)行,。
在進(jìn)行梯度洗脫時(shí),，由于多種溶劑混合，而且組成不斷變化,，因此帶來(lái)一些特殊問(wèn)題,，必須充分重視：
PS：（在液相色譜中對(duì)組分復(fù)雜的樣品采用梯度洗脫的方法。在同一個(gè)分析周期中,，按一定程序不斷改變流動(dòng)相的濃度配比,，稱為梯度洗脫。
從而可以使一個(gè)復(fù)雜樣品中的性質(zhì)差異較大的組分能按各自適宜的容量因子k達(dá)到良好的分離目的,。
梯度洗脫的優(yōu)點(diǎn)：1.縮短分析周期,；2.提高分離能力；3.峰型得到改善,，很少拖尾；4.增加靈敏度,。但有時(shí)引起基線漂移,。）
梯度洗脫的流動(dòng)相選擇不當(dāng)。
要注意溶劑的互溶性,，不相混溶的溶劑不能用作梯度洗脫的流動(dòng)相,。有些溶劑在一定比例內(nèi)混溶，超出范圍后就不互溶,，使用時(shí)更要引起注意,。
當(dāng)有機(jī)溶劑和緩沖液混合時(shí)，還可能析出鹽的晶體,，尤其使用磷酸鹽時(shí)需特別小心,。
忽略的空白梯度洗脫。
梯度洗脫所用的溶劑純度要求更高,，以保證良好的重現(xiàn)性,。進(jìn)行樣品分析前必須進(jìn)行空白梯度洗脫，以辨認(rèn)溶劑雜質(zhì)峰,，因?yàn)槿跞軇┲械碾s質(zhì)富集在色譜柱頭后會(huì)被強(qiáng)溶劑洗脫下來(lái),。
用于梯度洗脫的溶劑需徹底脫氣,，以防止混合時(shí)產(chǎn)生氣泡。
忽略了溶劑混合所帶來(lái)的粘度變化,。
混合溶劑的粘度常隨組成而變化,，因而在梯度洗脫時(shí)常出現(xiàn)壓力的變化。例如甲醇和水粘度都較小,，當(dāng)二者以相近比例混合時(shí)粘度增大很多,，此時(shí)的柱壓大約是甲醇或水為流動(dòng)相時(shí)的兩倍。
因此要注意防止梯度洗脫過(guò)程中壓力超過(guò)輸液泵或色譜柱能承受的zui大壓力,。
關(guān)于六通閥的正確使用和維護(hù)：
①樣品溶液進(jìn)樣前必須用0.45μm濾膜過(guò)濾,，以減少微粒對(duì)進(jìn)樣閥的磨損。
②轉(zhuǎn)動(dòng)閥芯時(shí)不能太慢,，更不能停留在中間位置,，否則流動(dòng)相受阻，使泵內(nèi)壓力劇增,，甚至超過(guò)泵的zui大壓力,；再轉(zhuǎn)到進(jìn)樣位時(shí)，過(guò)高的壓力將使柱頭損壞,。
③為防止緩沖鹽和樣品殘留在進(jìn)樣閥中,，每次分析結(jié)束后應(yīng)沖洗進(jìn)樣閥。通?？捎盟疀_洗,，或先用能溶解樣品的溶劑沖洗，再用水沖洗,。
關(guān)于色譜柱的使用和維護(hù):
菲羅門色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要,，稍有不慎就會(huì)降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞,。
在色譜操作過(guò)程中,，需要注意下列問(wèn)題，以維護(hù)色譜柱,。
調(diào)節(jié)流速太快,。
避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng)。
溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì)影響柱內(nèi)的填充狀況,；柱壓的突然升高或降低也會(huì)沖動(dòng)柱內(nèi)填料,，因此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行，在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉(zhuǎn)動(dòng)不能過(guò)緩（如前所述）,。
反沖色譜柱,。
一般說(shuō)來(lái)色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí),，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì),。
否則反沖會(huì)迅速降低柱效,。
預(yù)柱和保護(hù)柱
選擇使用適宜的流動(dòng)相（尤其是pH），以避免固定相被破壞,。有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一預(yù)柱,，分析柱是鍵合硅膠時(shí)，預(yù)柱為硅膠,，可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”,，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。
避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi),，需要對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一保護(hù)柱,。保護(hù)柱一般是填有相似固定相的短柱。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換,。
【1】泵壓跳動(dòng),，跳動(dòng)范圍10bar左右。
解決方法：
1,、原先小白頭有點(diǎn)臟,，更換后尚未解決；
2,、將主動(dòng)閥上的閥芯取出后,，發(fā)現(xiàn)有類似氣泡存在，浸入甲醇-水溶液超聲5min,，以試著去除氣泡,，重新將其安裝后再觀察，仍未解決,；
3,、更換新的閥芯，將其安裝后,，不再有跳動(dòng)，觀察一段時(shí)間后比較平穩(wěn),，成功解決,。
【2】發(fā)生故障：
①plug homing over pressure。
② 灌注及設(shè)流速時(shí)均無(wú)壓力也不見(jiàn)液體流出,。
③檢測(cè)器光閘不能復(fù)位④進(jìn)完大濃度樣品后,，進(jìn)空白相應(yīng)位置也出峰。
可能原因：
①在線過(guò)濾器堵了,。
②泵頭下單向閥堵了,。
③有可能是檢測(cè)池臟了，也有可能是光路有點(diǎn)堵,，再不行可能是燈壽命到了,。
④小抹布臟了,，需要換。
解決方法：
①在線過(guò)濾器卸下來(lái),，置燒杯,，加純化水煮沸5-10分鐘后甲醇超一下一般就可以了，如果還堵的話就拿稀硝酸泡,，還不行的話就換新的了,，這本身是個(gè)消耗品。
②把泵頭下單向閥卸下來(lái),，兩個(gè)都有可能堵,，剛卸下來(lái)時(shí)豎著在耳邊搖一搖是聽(tīng)不到聲音的。簡(jiǎn)單的拿洗耳球把單向閥吹吹就行了（注意方向）,，吹了沒(méi)反應(yīng)可以拿溶劑超聲,，但不可水煮，一般超至在耳邊搖能聽(tīng)見(jiàn)聲音就不影響實(shí)驗(yàn),。
③先用溶劑把檢測(cè)池沖沖,，用啥試具體樣品而定；若沖了還不行,，把檢測(cè)池卸下,，看燈能量，若能量還可以（有個(gè)幾千）,，可能得清洗光路了,。di一次清洗的話建議還是叫工程師來(lái)，因?yàn)榇謇淼牟考跈z測(cè)器的zui下方,，有一個(gè)黑色片片,，中間有一條縫，而且那一塊的螺絲都是八角的,，卸起來(lái)很麻煩,。
④把5個(gè)樣品盤都拿出來(lái)，可以看見(jiàn)里面有一個(gè)黑色突起（看不清用手電筒）,，平時(shí)進(jìn)樣針就是從那個(gè)地方吸樣的,。手伸進(jìn)去就可以卸下來(lái)，里面有一個(gè)小白圈圈（用多了自然就黑了）,，換一個(gè)新的就行了,，買儀器時(shí)一般配有10個(gè)。
