親水相互作用色譜長期被人們使用，但是HILIC這個名詞僅僅是最近才被使用,。
分析物通常是極性化合物,，如極性代謝物，碳水化合物或肽,。
HILIC 可以被看作正相色譜向水性流動相領域的延續(xù),。
流動相是水相緩沖液(< 40%)及有機溶劑。
固定相是強親水性的極性吸附劑,，如硅膠鍵合相,，極性聚合物填料或離子交換吸附劑。
這些固定相的共同特點是它們和水的作用力很強,，因此屬于“親水性”,。

HILIC模式使用的梯度和反相模式相反。初始條件包括高比例有機相,，典型的濃度是95%有機相如乙腈,，逐步降低到水相。
因此,，HILIC色譜又被稱為反反相色譜（reversed-reversed-phase）,。

親水相互作用色譜屬于正相色譜,。

它與反相色譜有著相反的作用方式：親水性低(疏水性強)的化合物將會先被溶出。
使用C18柱分析親水性化合物時,，一般都要使用離子對試劑,。
而由于HILIC不需使用任何離子對試劑,，所以由離子對試劑引起的平衡時間長，色譜柱劣化加快，流動相調(diào)制復雜等諸多問題都將不復存在,。
另外,，HILIC的固定相三唑基具有陰離子交換作用，此作用對酸性化合物有較強的保留能力,。

特點：

• 鍵合相采用特殊的酰胺基團，適用于分離小分子糖等物質

• 較普通C18更適合分離強極性,、高水溶性,、堿性有機化合物

• 可替代傳統(tǒng)的氨基柱和硅膠柱，具有更好的重現(xiàn)性和壽命

HILIC 是一種親水作用色譜模式,，其洗脫是以化合物親水性/ 極性增加的次序排列,，典型的流動相是乙腈（40%--97%）－水（或揮發(fā)性緩沖鹽），同時它可以使用更高揮發(fā)性的流動相或緩沖鹽,，增加了HILIC 色譜的LC/MS 分析靈敏度,，降低了分離的壓力，而且HILIC 色譜摒棄了離子對試劑,，方便了制備色譜方法的開發(fā),。

HILIC 的優(yōu)勢及不足
通過上面我們介紹到的HILIC的機理及流動相和固定相的特征我們不難得出HILIC在分析極性化合物方面的優(yōu)勢。
首先,，HILIC機理對于幾乎所有的極性化合物都有較好的保留,，大大解決了我們分析極性化合物時遇到的難以保留的問題。
其次,，由于HILIC流動相有機相比例很高,，所以對于質譜檢測器來說，可以確保高效去溶劑化,，大大提高化合物的信噪比,。
另外，較高的有機相比例組成也會帶來更低的色譜柱壓力,，在這個基礎上,，我們采用小粒徑或者小內(nèi)經(jīng)的色譜柱時就不會受到壓力的困擾。

HILIC的優(yōu)勢是很明顯的,，但是對于任何一種分離手段,，也都存在一些不足之處。由于HILIC保留機理比較復雜,，所以在方法優(yōu)化及色譜柱選擇上會比普通反相色譜柱要復雜,。
HILIC保留機理由于需要形成富水層，所以色譜柱平衡時間會稍長,，建議是普通反相的2-3倍,，當然，這個問題其實在反相采用離子對試劑分析的時候也會碰到,。另外,，由于極性化合物在水中的溶解性好，但是如果我們采用純水相來溶劑樣品的話，有時候會出現(xiàn)溶劑效應帶來的色譜峰展寬,，就如同我們反相分析時用純有機相溶解樣品有時也會出現(xiàn)類似的問題,。
所以，建議采用純有機相或者與流動相比例接近的溶劑來溶解樣品,。

通過以上關于HILIC的介紹,，相信大家對HILIC有了更進一步的了解。在以后我們分析極性化合物方面又多了一個更有力的工具,！

當然這些比較經(jīng)典的方法對于很多極性化合物的分析效果都是不錯的,，但是都會面臨一些問題,。

比如，加入離子對試劑,，本身離子對試劑對于色譜柱的壽命會有一定的影響,，流動相制備也相對復雜，另外很多時候也沒法與質譜兼容,；采用極性封端類的柱子,，流動相中會用到比較高比例的水，壓力會比較高,，而且即使水相比例較高,，對于一些很強極性的物質，仍然難以得到很好地保留,。而HILIC可以克服以上的缺點,，大大滿足您對極性化合物的分析要求。

HILIC是 Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography（親水作用液相色譜）的簡稱,。我們首先要清楚,，HILIC不是某個廠家的色譜柱系列或品牌，也不是某個鍵合相,，它代表的是一種分離機理,，而具備這種分離機理的鍵合相種類非常多。
在HILIC中，固定相是極性的,，流動相中的水相部分表現(xiàn)為強洗脫溶劑,，這與傳統(tǒng)的反相色譜法完全相反。

HILIC 發(fā)展歷史
HILIC分離模式最早可以追溯到1951年,，Gregor等人描述了一種離子交換樹脂表面的富水層概念,，在1975年的時候，科學家在氨基柱上實現(xiàn)了糖類的分析也是屬于HILIC的機理,，但是直到1990年科學家Alpert才正式提出了HILIC的概念,但是這時候HILIC并沒有得到廣泛的推廣,，到了2000年以后，越來越多的人開始認識并使用HILIC機理進行極性化合物的分析,，HILIC才得到了廣泛的認可,。

HILIC 的作用機理
HILIC可以被認為是反相液相色譜通過采用極性固定相來運行的。
HILIC中采用的流動相是含有少量水/緩沖鹽或其他極性溶劑的高比例有機相（>60%,，常用乙腈）,。
流動相中的水形成一個富水層被吸附在固定相表面，極性物質首先進入富水層得到保留,。
極性化合物是通過一個復雜的混合模式被保留的,，包括：富水層和流動相之間的親水分配、極性官能團和固定相間的氫鍵作用以及離子官能團的靜電作用,。
當然,，親水分配是最主要的保留模式。
從保留機理來看,，HILIC和反相色譜柱是有著非常大的差別的,。

HILIC 流動相
HILIC最常用的流動相是乙腈/水系統(tǒng)。
比例：有機溶劑>60%,，流動相中至少需要3%的水相（因為HILIC保留機理是通過形成富水層來實現(xiàn)的）,。
洗脫強度：四氫呋喃<丙酮<乙腈<異丙醇<乙醇 <甲醇<水。
對于條件摸索來說,，等度條件下建議80%乙腈為起始條件來調(diào)整比例,；梯度條件建議95%乙腈------60%乙腈。
對于HILIC來說,，我們有時也會在流動相中加入緩沖鹽,，建議使用甲酸銨/乙酸銨（常用乙酸銨）緩沖液，可以同時滿足溶解度（醋酸鹽在高比例乙腈中溶解度較好）以及質譜檢測器兼容性的要求,。

HILIC 固定相
上面我們提到,，HILIC保留機理的固定相種類非常多。常用的包括：
1,，裸硅膠（如賽默飛的Hypersil Silica, SyncronisSilica及Accucore HILIC等）,，這種固定相在HILIC中也是應用最廣泛的固定相,，未鍵合硅膠由于表面具有硅羥基，具有一定的陽離子交換活性,，所以可以增強對堿性化合物的保留,。
2，兩性離子固定相（如Syncronis HILIC）,此種固定相既有陽離子基團,，又有陰離子基團,，二者比例1：1，因此表面靜電荷為零,。對于分析中性極性化合物是一個不錯的選擇,。
3，酰胺鍵合相（如Accocore Amide HILIC）,通過丙基或者專有連接基團將酰胺官能團鍵合到硅膠表面,，此種鍵合相能夠提供固定相和分析物之間的強有力的氫鍵作用,，絕對保留能力強，對于碳水化合物分析是一個不錯的選擇,，如聚糖的分析,。酰胺鍵合相不太容易產(chǎn)生不可逆吸附（氨丙基固定相經(jīng)常會遇到這樣的問題），同時酰胺類色譜柱表現(xiàn)出良好的重現(xiàn)性和穩(wěn)定性,。其他的HILIC固定相包括：二醇基,、氨丙基（氨基柱）、氰丙基（氰基柱）以及其他專有的特殊官能團鍵合相,。

ACE HILIC 液相色譜柱 HPLC | UHPLC