在高效液相分析檢測樣品的過程中，色譜柱會受到來自于樣品及色譜系統(tǒng)的污染，從而導(dǎo)致色譜柱耐用性差、壽命縮短。

來自于色譜系統(tǒng)的污染主要指,，HPLC儀器系統(tǒng)中部件磨損而產(chǎn)生的固體顆粒，以及流動相系統(tǒng)過濾不完全殘留的固體顆粒,。來自于樣品的污染主要指,，未完全溶解的樣品或者已完全溶解的樣品進(jìn)入色譜系統(tǒng)中,，由于樣品溶劑和流動相溶劑對樣品溶解存在的溶解度差異，導(dǎo)致沉淀析出污染系統(tǒng),。

特別是對于中藥,、天然產(chǎn)物、合成中間體及生物藥品的檢測,，因基質(zhì)的復(fù)雜性,，色譜柱受污染的情況會更加嚴(yán)重。污染會導(dǎo)致色譜系統(tǒng)壓力升高,、色譜柱塌陷,、填料變色等，從而帶來檢測成本高,，測試結(jié)果不準(zhǔn)確等各種影響,。

圖：系統(tǒng)壓力升高或樣品基質(zhì)復(fù)雜導(dǎo)致分析柱污染

保護(hù)柱是液相色譜分析中重要的色譜耗材，使用保護(hù)柱可大大降低分析柱受污染的程度,，延長分析柱使用壽命,。

保護(hù)柱位于進(jìn)樣器與分析柱之間， 作用主要兩方面：

1. 截留不溶性顆粒

2. 吸附樣品基質(zhì)中的雜質(zhì)

以下幾種情況建議使用保護(hù)柱：

1. 中藥,、天然產(chǎn)物及合成中間體等基質(zhì)較復(fù)雜的樣品分析——因溶解性差異導(dǎo)致樣品析出而污染分析柱的情況比較嚴(yán)重,，梯度洗脫時影響更大。

2. 生物樣品分析——因樣品的不可逆吸附導(dǎo)致的污染,，保護(hù)柱可先于分析柱承受這種污染,，從而延長分析柱壽命。

保護(hù)柱很重要,，但選擇合適的保護(hù)柱更重要,，選擇或使用不當(dāng)也可能帶來截然相反的效果。

保護(hù)柱分類及選擇：

從材質(zhì)上分：不銹鋼材質(zhì)和PEEK（聚醚醚酮）材質(zhì)

PEEK 材質(zhì)優(yōu)缺點(diǎn)——樣品對金屬離子比較敏感時,，選擇PEEK材質(zhì)比較合適,，比如某些蛋白分析會用到PEEK材質(zhì)的分析柱，主要就是考慮到這方面的因素,；

不銹鋼材質(zhì)優(yōu)缺點(diǎn)——大部分小分子化合物的分析,，選擇不銹鋼材質(zhì)保護(hù)柱居多，特別是當(dāng)流動相體系使用到四氫呋喃（THF）或DMSO等一些溶解性較強(qiáng)的溶劑時,，必須選擇不銹鋼材質(zhì),，甚至對于HPLC系統(tǒng)的管路也需要替換成不銹鋼材質(zhì)，因THF對于PEEK管路有相當(dāng)強(qiáng)的腐蝕作用,。

從結(jié)構(gòu)上分：卡套式（柱芯+柱套）和直接填裝短柱

直接填裝短柱優(yōu)缺點(diǎn)——這種結(jié)構(gòu)的保護(hù)柱實(shí)質(zhì)就是短的色譜柱,，一般填裝的填料跟分析柱填料完全一樣。生物樣品分析中,，用這種類型保護(hù)柱居多,，除可過濾一些不溶顆粒外,，還可除去一些在分析柱上易吸附的雜質(zhì)。缺點(diǎn)是,，一次性使用,，污染嚴(yán)重時，只能報廢,。

卡套式保護(hù)柱優(yōu)缺點(diǎn)——卡套式保護(hù)柱的柱套可反復(fù)使用,，柱芯污染后可替換，廠家會提供配套的保護(hù)柱芯,，但購買時需要注意,，柱芯中有與分析柱匹配的填料，需要確認(rèn)柱芯中的填料類型再購買,。同時,，柱芯和柱套需是來源于同一廠家的同一規(guī)格，否則,，會存在匹配上的差異,，導(dǎo)致峰型異常或者漏液,。

從連接方式上分：獨(dú)立式和直連式

獨(dú)立式保護(hù)柱優(yōu)缺點(diǎn)

——保護(hù)柱和分析柱之間用一段管路連接,，不用擔(dān)心與分析柱在連接上的匹配問題。但使用管路連接時,，連接不當(dāng)容易產(chǎn)生死體積,。

直連式保護(hù)柱優(yōu)缺點(diǎn)——保護(hù)柱接口帶螺紋，可直接與分析柱連接,，死體積小,，UPLC分析時建議選擇直連式保護(hù)柱,；缺點(diǎn)：購買時需保證接口與分析柱匹配。

保護(hù)柱選擇考慮以下幾方面因素：

1. 除非特殊情況,，一般選擇填料基質(zhì)與分析柱基質(zhì)完全相同的保護(hù)柱,。

2. 選擇保護(hù)柱尺寸可按柱體積計(jì)算，保護(hù)柱體積按分析柱體積的5%~10%即可,；如4.6*250mm的分析柱體積約為4mL,，保護(hù)柱體積可選擇在0.2~0.4mL之間為宜。同時,，保護(hù)柱內(nèi)徑應(yīng)與分析柱內(nèi)徑相同或相當(dāng),。

保護(hù)柱使用注意事項(xiàng)：

1. 獨(dú)立式保護(hù)柱與分析柱連接時，連接管路盡可能短,，且接口切面平滑,，盡量減少死體積以降低柱外展寬效應(yīng),。

2. 卡套式保護(hù)柱一般未標(biāo)注液流方向，使用時最好自行標(biāo)注,，并按照標(biāo)注方向來使用,，以免正反向使用后，截留的雜質(zhì)污染分析柱,。

3. 直接填裝的短柱型保護(hù)柱,，出現(xiàn)柱壓升高或峰型變差時，可不接分析柱進(jìn)行反向清洗,，清洗溶劑可參考分析柱清洗溶劑,。

4. 卡套式保護(hù)柱，柱芯替換時,，注意柱芯與柱套是否存在方向上的匹配,，同時不易旋擰過緊，以防滑絲,。

5. 保護(hù)柱或柱芯一般不建議超聲清洗,，因可能對填料表面修飾有影響。

6. 如同一保護(hù)柱配不同的分析柱使用,，每次使用前,，保護(hù)柱需先清洗并用流動相平衡保護(hù)柱一段時間后，再接分析柱使用,。

保護(hù)柱與柱前過濾器的區(qū)別和使用：

使用保護(hù)柱的目的在于延長分析柱的使用壽命,，當(dāng)分析柱造價昂貴時，保護(hù)柱的價值尤其能體現(xiàn),，某些情況下,，當(dāng)使用的分析柱本身價格便宜，保護(hù)柱并非必選,，推薦使用柱前過濾器更合適,。

柱前過濾器與保護(hù)柱兩者外形相似，差異主要在于：保護(hù)柱內(nèi)芯裝有填料,，而柱前過濾器內(nèi)芯是可更換的濾片（一般為帶孔的不銹鋼燒結(jié)板）

因此,，從結(jié)構(gòu)可以推測使用上的差異：

柱前過濾器——通用性強(qiáng)，任何分析柱前都可使用,，因其濾芯只起到過濾和截留雜質(zhì)的作用,，濾片污染后可超聲清洗，反復(fù)使用,。

保護(hù)柱——柱中填料除了起截留雜質(zhì)的作用外,，也可除去樣品中易吸附的雜質(zhì)，這一點(diǎn)對生物樣品分析尤其重要。