在高效液相分析檢測樣品的過程中,，色譜柱會受到來自于樣品及色譜系統(tǒng)的污染,，從而導(dǎo)致色譜柱耐用性差,、壽命縮短。
來自于色譜系統(tǒng)的污染主要指,，HPLC儀器系統(tǒng)中部件磨損而產(chǎn)生的固體顆粒,，以及流動相系統(tǒng)過濾不完全殘留的固體顆粒,。來自于樣品的污染主要指，未完全溶解的樣品或者已完全溶解的樣品進(jìn)入色譜系統(tǒng)中,，由于樣品溶劑和流動相溶劑對樣品溶解存在的溶解度差異,，導(dǎo)致沉淀析出污染系統(tǒng)。
特別是對于中藥,、天然產(chǎn)物,、合成中間體及生物藥品的檢測，因基質(zhì)的復(fù)雜性,，色譜柱受污染的情況會更加嚴(yán)重,。污染會導(dǎo)致色譜系統(tǒng)壓力升高、色譜柱塌陷,、填料變色等,，從而帶來檢測成本高，測試結(jié)果不準(zhǔn)確等各種影響,。
圖：系統(tǒng)壓力升高或樣品基質(zhì)復(fù)雜導(dǎo)致分析柱污染
保護(hù)柱是液相色譜分析中重要的色譜耗材,，使用保護(hù)柱可大大降低分析柱受污染的程度，延長分析柱使用壽命,。
保護(hù)柱位于進(jìn)樣器與分析柱之間,， 作用主要兩方面：
1. 截留不溶性顆粒
2. 吸附樣品基質(zhì)中的雜質(zhì)
以下幾種情況建議使用保護(hù)柱：
1. 中藥、天然產(chǎn)物及合成中間體等基質(zhì)較復(fù)雜的樣品分析——因溶解性差異導(dǎo)致樣品析出而污染分析柱的情況比較嚴(yán)重,，梯度洗脫時影響更大,。
2. 生物樣品分析——因樣品的不可逆吸附導(dǎo)致的污染，保護(hù)柱可先于分析柱承受這種污染,，從而延長分析柱壽命,。
保護(hù)柱很重要，但選擇合適的保護(hù)柱更重要,，選擇或使用不當(dāng)也可能帶來截然相反的效果,。
保護(hù)柱分類及選擇：
從材質(zhì)上分：不銹鋼材質(zhì)和PEEK（聚醚醚酮）材質(zhì)
PEEK 材質(zhì)優(yōu)缺點(diǎn)——樣品對金屬離子比較敏感時，選擇PEEK材質(zhì)比較合適,，比如某些蛋白分析會用到PEEK材質(zhì)的分析柱,，主要就是考慮到這方面的因素；
不銹鋼材質(zhì)優(yōu)缺點(diǎn)——大部分小分子化合物的分析,，選擇不銹鋼材質(zhì)保護(hù)柱居多,，特別是當(dāng)流動相體系使用到四氫呋喃（THF）或DMSO等一些溶解性較強(qiáng)的溶劑時，必須選擇不銹鋼材質(zhì),，甚至對于HPLC系統(tǒng)的管路也需要替換成不銹鋼材質(zhì),，因THF對于PEEK管路有相當(dāng)強(qiáng)的腐蝕作用。
從結(jié)構(gòu)上分：卡套式（柱芯+柱套）和直接填裝短柱
直接填裝短柱優(yōu)缺點(diǎn)——這種結(jié)構(gòu)的保護(hù)柱實(shí)質(zhì)就是短的色譜柱,，一般填裝的填料跟分析柱填料完全一樣,。生物樣品分析中,，用這種類型保護(hù)柱居多，除可過濾一些不溶顆粒外,，還可除去一些在分析柱上易吸附的雜質(zhì),。缺點(diǎn)是，一次性使用,，污染嚴(yán)重時,，只能報(bào)廢。
卡套式保護(hù)柱優(yōu)缺點(diǎn)——卡套式保護(hù)柱的柱套可反復(fù)使用,，柱芯污染后可替換,，廠家會提供配套的保護(hù)柱芯，但購買時需要注意,，柱芯中有與分析柱匹配的填料,，需要確認(rèn)柱芯中的填料類型再購買,。同時,，柱芯和柱套需是來源于同一廠家的同一規(guī)格，否則,，會存在匹配上的差異,，導(dǎo)致峰型異常或者漏液,。
從連接方式上分：獨(dú)立式和直連式
獨(dú)立式保護(hù)柱優(yōu)缺點(diǎn)
——保護(hù)柱和分析柱之間用一段管路連接,，不用擔(dān)心與分析柱在連接上的匹配問題。但使用管路連接時,，連接不當(dāng)容易產(chǎn)生死體積,。
直連式保護(hù)柱優(yōu)缺點(diǎn)——保護(hù)柱接口帶螺紋，可直接與分析柱連接,，死體積小,，UPLC分析時建議選擇直連式保護(hù)柱；缺點(diǎn)：購買時需保證接口與分析柱匹配,。
保護(hù)柱選擇考慮以下幾方面因素：
1. 除非特殊情況,，一般選擇填料基質(zhì)與分析柱基質(zhì)完全相同的保護(hù)柱。
2. 選擇保護(hù)柱尺寸可按柱體積計(jì)算,，保護(hù)柱體積按分析柱體積的5%~10%即可,；如4.6*250mm的分析柱體積約為4mL，保護(hù)柱體積可選擇在0.2~0.4mL之間為宜,。同時,，保護(hù)柱內(nèi)徑應(yīng)與分析柱內(nèi)徑相同或相當(dāng)。
保護(hù)柱使用注意事項(xiàng)：
1. 獨(dú)立式保護(hù)柱與分析柱連接時,，連接管路盡可能短,，且接口切面平滑,，盡量減少死體積以降低柱外展寬效應(yīng)。
2. 卡套式保護(hù)柱一般未標(biāo)注液流方向,，使用時最好自行標(biāo)注,，并按照標(biāo)注方向來使用，以免正反向使用后,，截留的雜質(zhì)污染分析柱,。
3. 直接填裝的短柱型保護(hù)柱，出現(xiàn)柱壓升高或峰型變差時,，可不接分析柱進(jìn)行反向清洗,，清洗溶劑可參考分析柱清洗溶劑。
4. 卡套式保護(hù)柱,，柱芯替換時,，注意柱芯與柱套是否存在方向上的匹配，同時不易旋擰過緊,，以防滑絲,。
5. 保護(hù)柱或柱芯一般不建議超聲清洗，因可能對填料表面修飾有影響,。
6. 如同一保護(hù)柱配不同的分析柱使用,，每次使用前，保護(hù)柱需先清洗并用流動相平衡保護(hù)柱一段時間后,，再接分析柱使用,。
保護(hù)柱與柱前過濾器的區(qū)別和使用：
使用保護(hù)柱的目的在于延長分析柱的使用壽命，當(dāng)分析柱造價昂貴時,，保護(hù)柱的價值尤其能體現(xiàn),，某些情況下，當(dāng)使用的分析柱本身價格便宜,，保護(hù)柱并非必選,，推薦使用柱前過濾器更合適。
柱前過濾器與保護(hù)柱兩者外形相似,，差異主要在于：保護(hù)柱內(nèi)芯裝有填料,，而柱前過濾器內(nèi)芯是可更換的濾片（一般為帶孔的不銹鋼燒結(jié)板）
因此，從結(jié)構(gòu)可以推測使用上的差異：
柱前過濾器——通用性強(qiáng),，任何分析柱前都可使用,，因其濾芯只起到過濾和截留雜質(zhì)的作用，濾片污染后可超聲清洗,，反復(fù)使用,。
保護(hù)柱——柱中填料除了起截留雜質(zhì)的作用外，也可除去樣品中易吸附的雜質(zhì)，這一點(diǎn)對生物樣品分析尤其重要,。
