五個(gè)清洗液相柱污染物的方法
液相柱是迄今在高效液相色譜中應(yīng)用最廣泛的技術(shù),,主要是因?yàn)樗m用于分析絕大多數(shù)的非極性物質(zhì)和很多的可離子化的及離子化合物,。
如果污染是因?yàn)橹貜?fù)進(jìn)樣時(shí)強(qiáng)保留物質(zhì)的累積引起的,利用簡單的清洗步驟來除去這些污染物往往就能恢復(fù)其色譜性能,。一般有如下五個(gè)方法:
第一個(gè):經(jīng)過等度運(yùn)行后的色譜柱,,有時(shí)用90~100%含量的溶劑B(雙溶劑反相系統(tǒng)中洗脫能力較強(qiáng)的溶劑,如甲醇,、乙晴,、四氫 呋喃等)沖洗20個(gè)柱體積可以清除污染物(色譜柱的柱體積和空柱管體積概念不同,一根4.6x250mm柱子的柱體積只有2.5ml,,2.1x150mm的是0.28ml),。
第二個(gè):如果使用的是緩沖鹽系統(tǒng),不要直接切換到強(qiáng)溶劑,,突然轉(zhuǎn)換到高濃度有機(jī)溶劑可能會(huì)使HPLC流動(dòng)體系中的緩沖鹽沉淀,,這樣會(huì)導(dǎo)致更大的問題,,如柱頭篩板堵塞、連接管路堵塞,、泵泄漏,、活塞損傷或進(jìn)樣閥轉(zhuǎn)軸失靈。應(yīng)該先用無緩沖鹽流動(dòng)相(即把緩沖液換成水),,沖洗5~10個(gè)柱體積以后才切換到用強(qiáng)溶劑清洗,。
第三個(gè):有時(shí)候,強(qiáng)溶劑B也沒法把殘留在色譜柱上的污染物洗掉,。那么就需要用更強(qiáng)的溶劑或者是系列溶劑組合,。
第四個(gè):如果污染物不是生物質(zhì)的,一種強(qiáng)溶劑或幾種溶劑組合清洗基本能解決問題,。柱子生產(chǎn)廠家的網(wǎng)頁和產(chǎn)品說明書上很多也有清洗方法推薦,。
第五個(gè):所有的清洗方法的模式普遍都類似,溶劑系列中所用溶劑的強(qiáng)度逐級增加,,最后一個(gè)溶劑往往是非極性(疏水性)很強(qiáng)的(如醋酸乙酯甚至是烷烴),,以便于溶解脂質(zhì)、油類等非極性污染物,。溶劑系列中每個(gè)溶劑都保證能與下一個(gè)溶劑互溶,。
整個(gè)清洗過程結(jié)束后,在回到原來的流動(dòng)相體系前,,必須借助一個(gè)中等強(qiáng)度的互溶性非常好的溶劑過渡,。例如, 異丙醇是一個(gè)非常好的過渡溶劑,,它既能與正己烷或二氯甲烷互溶又能與水相溶劑互溶,。但是異丙醇粘度非常大,必須確保較低的流速以免使泵壓過高,。