1.農(nóng)藥殘留的生物測(cè)定技術(shù)
利用指示生物的生理生化反應(yīng)來(lái)判斷農(nóng)藥殘留及其污染情況。例如,可以用實(shí)驗(yàn)室養(yǎng)的敏感性家蠅為測(cè)定材料,,以其接觸待測(cè)樣品后的中毒程度來(lái)表示該樣品中的殺蟲劑殘留,;以病菌生長(zhǎng)受抑制的程度來(lái)檢測(cè)殺菌劑的殘留,以玉米或其它指示植物根長(zhǎng)受抑制的程度來(lái)檢測(cè)土壤中磺酰脲類除草劑殘留等,。該方法無(wú)需對(duì)樣品前處理比較簡(jiǎn)單快速或無(wú)需進(jìn)行前處理,但對(duì)指示生物要求較高,,測(cè)定結(jié)果不能確定農(nóng)藥品種,,并且可能出現(xiàn)假陽(yáng)性或假陰性的情況,,該方法可作為快速檢驗(yàn)方法用于農(nóng)產(chǎn)品引起中毒或在現(xiàn)場(chǎng)使用。
2.農(nóng)藥殘留的理化檢測(cè)
用于農(nóng)藥殘留的化學(xué)檢測(cè)方法有分光光度法,、極譜法,、原子吸收光譜法、薄層層析法,、氣相色譜法,、液相色譜法、同位素標(biāo)記法,、核磁共振波譜法,、色質(zhì)聯(lián)用法等。自二十世紀(jì)九十年代以來(lái),,現(xiàn)代化學(xué)分析技術(shù)日新月異,,許多新技術(shù)已進(jìn)入實(shí)用階段,如毛細(xì)管電脈儀技術(shù)(CZE),,色質(zhì)聯(lián)用技術(shù)(GC-MS,、HPLC-MS)超臨界流體色譜技術(shù)(SFC),直接光譜分析技術(shù)等,。這些新技術(shù)的應(yīng)用,,大大提高農(nóng)藥殘留分析的靈敏度,簡(jiǎn)化分析步驟,,提高了分析效率,。但是,這些分析方法有的靈敏度不高,,如分光光度法,、薄層層析法等。有的需要昂貴的儀器,,如色質(zhì)聯(lián)用法,、核磁共振波譜法等。還有的需要特殊的設(shè)備,,如同位素標(biāo)記法等,。因此,目前,,普遍采用的還是氣相色譜法和液相色譜法,,它們具有簡(jiǎn)便、快速,、靈敏以及穩(wěn)定性和重現(xiàn)性好,,線性范圍寬、耗資低等優(yōu)點(diǎn)。
(1)氣相色譜法(GC)
采用氣體作流動(dòng)相的色譜法,,用于揮發(fā)性農(nóng)藥的檢測(cè),,具有高選擇性、高分離效能,、高靈敏度,、快速和特點(diǎn),是農(nóng)藥殘留量檢測(cè)最常用的方法之一,,目前用于農(nóng)藥殘留檢測(cè)的檢測(cè)器主要有電子捕獲檢測(cè)器(ECD),、微池電子捕獲檢測(cè)器(u-ECD),、火焰光度檢測(cè)器(FPD),、脈沖火焰光度檢測(cè)器(P-FPD)、氮磷檢測(cè)器(NPD)等,。
(2)液相色譜法(HPLC)
采用液體作流動(dòng)相的一種色譜法,,它可以分離檢測(cè)極性強(qiáng)、分子量大及離子型農(nóng)藥,,可用于不易氣化或受熱易分解的農(nóng)藥的檢測(cè),。近年來(lái),采用新型高效固定相,、高壓泵和高靈敏度的檢測(cè)器,,柱前和柱后衍生技術(shù)、以及計(jì)算機(jī)聯(lián)用等,,大大提高了檢測(cè)效率,、靈敏度、速度和操作自動(dòng)化程度,。目前用于農(nóng)藥殘留檢測(cè)最多是紫外吸收檢測(cè)器(UV),、兩極管陣列檢測(cè)器(DAD)和熒光檢測(cè)器(FLD)
(3)色質(zhì)聯(lián)用法(GC-MS,HPLC-MS)
氣相或液相與質(zhì)譜聯(lián)用,它既具備了色譜的高分離效能優(yōu)點(diǎn),,而且具備了質(zhì)譜準(zhǔn)確鑒定化合物結(jié)構(gòu)的特點(diǎn),,可同時(shí)達(dá)到定性、定量的檢測(cè)目的,,特別適合于農(nóng)藥代謝物,、降解物的檢測(cè)和多殘留檢測(cè)等,不過(guò)此法需要貴重儀器且操作繁雜困難,,不適合于經(jīng)常性的檢測(cè),。一般可用來(lái)做最后的確認(rèn)工作。
(4)超臨界流體色譜(SFC)
是以超臨界流體作為流動(dòng)相的色譜體系,,超臨界流體是指物質(zhì)處于臨界溫度和臨界壓力時(shí)的狀態(tài),,介于氣、液態(tài)之間,兼有氣體和液體的某些物理特性,,因此,,超臨界流體色譜既有氣譜的快速、高效,、靈敏的特點(diǎn),,又有能檢測(cè)對(duì)熱不穩(wěn)定和大分子化合物的液譜的特點(diǎn)。
(5)毛細(xì)管電泳法(CE)
該方法是利用毛細(xì)管及高電壓(15-30KW)分離各種農(nóng)藥殘留物,,非常適合于一些難于用傳統(tǒng)色譜法分離的離子化樣品的分離和分析,,比HPLC有高10-1000倍的分析能力,而且所需之緩沖液具有不危害環(huán)境之特點(diǎn),,在短時(shí)間(30分鐘)內(nèi)就可以完成定性及定量分析
3.常用農(nóng)藥殘留的快速檢測(cè)方法
(1)酶抑制法:有機(jī)磷與氨基甲酸酯農(nóng)藥共為神經(jīng)系統(tǒng)乙酰膽堿脂酶抑制物,,因此可以利用農(nóng)藥靶標(biāo)酶-乙酰膽用堿酯酶(AChE)受抑制的程度來(lái)檢測(cè)有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥。該方法目前已開發(fā)出了相應(yīng)的各種速測(cè)卡和速測(cè)儀,。該方法檢測(cè)時(shí),,蔬菜中的水份、碳水化合物,、蛋白質(zhì),、脂等物質(zhì)不會(huì)對(duì)農(nóng)藥殘留物的檢測(cè)造成干擾,不必進(jìn)行分離去雜,,節(jié)省了大量預(yù)處理時(shí)間,,從而能達(dá)到快速檢測(cè)的目的,因此該方法具有快速方便,、前處理簡(jiǎn)單,、無(wú)需儀器或儀器相對(duì)簡(jiǎn)單,適用于現(xiàn)場(chǎng)的定性和半定量測(cè)定,,目前的農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)就是用了該方法,,已上升為農(nóng)業(yè)部行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。但該方法只能用于測(cè)定有機(jī)磷和氨基甲酸酯類殺蟲劑,,其靈敏度和所使用的酶,、顯色反應(yīng)時(shí)間和溫度密切相關(guān),經(jīng)酶法檢測(cè)出陽(yáng)性后,,需用標(biāo)準(zhǔn)儀器檢驗(yàn)方法進(jìn)一步檢測(cè),,以鑒定殘留農(nóng)藥品種及準(zhǔn)確殘留量。
(2)免疫分析法:有放射性免疫分析,、酶免疫分析,、多組份分析物免疫分析、免疫傳感器分析等,。最為常用的是酶聯(lián)免疫法(ELISA法),,它主要是以抗原與抗體的特異性,、可逆性結(jié)合反應(yīng)為基礎(chǔ)的農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法。該法利用化學(xué)物質(zhì)在動(dòng)物體內(nèi)能產(chǎn)生免疫抗體的原理,,先將小分子農(nóng)藥化合物與大分子生物物質(zhì)結(jié)合成大分子,,做成抗原,并使之在動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生抗體,,對(duì)抗體篩選制成試劑盒,,通過(guò)抗原與抗體之間發(fā)生的酶聯(lián)免疫反應(yīng),依靠比色來(lái)確定農(nóng)藥殘留,,它具有專一性強(qiáng),、靈敏度高、快速,、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn),,試劑盒可廣泛用于現(xiàn)場(chǎng)樣品和大量樣品的快速檢測(cè),可準(zhǔn)確定性,、定量,。但由于受到農(nóng)藥種類多,,抗體制備難度大,、在不能肯定樣本中的農(nóng)藥殘留種類時(shí)檢測(cè)有一定的盲目性以及抗體依賴國(guó)外進(jìn)口等影響,酶聯(lián)免疫法的應(yīng)用范圍受到較大的限制,,目前,,我國(guó)市場(chǎng)上酶聯(lián)免疫法成品試劑盒依賴從國(guó)外進(jìn)口。
(3)化學(xué)法—速測(cè)靈法
‘速測(cè)靈’法應(yīng)用的原理是具有強(qiáng)催化作用的金屬離子催化劑,,使各類有機(jī)磷農(nóng)藥(磷酸酯,、二硫代酸酯、磷酸胺)在催化作用下水解為磷酸與醇,,水解產(chǎn)物與顯色劑反應(yīng),,使顯色劑的紫紅色退去變成無(wú)色。主要針對(duì)的是有機(jī)磷農(nóng)藥的殘留檢測(cè),,特別是甲胺磷,、對(duì)硫磷農(nóng)藥。這種方法采用化學(xué)反應(yīng)原理,,避免了通常所使用生化方法(酶法)的缺點(diǎn)(酶的制備,、保存以及反應(yīng)需比較嚴(yán)格的條件),靈敏度也達(dá)到一定的要求,。但是此方法主要針對(duì)的是甲胺磷,、對(duì)硫磷等較高毒性的有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的定性檢測(cè)。