HPLC分析條件的篩選主要包括以下步驟:
1. 確定目標(biāo)化合物性質(zhì),。需要了解待分離雜質(zhì)的一些性質(zhì),,包括分子量、結(jié)構(gòu)式(主要看有哪種基團(tuán))等,,并預(yù)測該種物質(zhì)在哪種有機(jī)溶劑中易容,。根據(jù)結(jié)構(gòu)式可以大致預(yù)測分子極性大小,同時也可以判斷該物質(zhì)是否容易水解,。
2. 根據(jù)目標(biāo)化合物的性質(zhì),,結(jié)合雜質(zhì)在各種常見洗脫溶劑中的溶解性,例如在甲醇,、乙腈,、正己烷中哪個比較易溶,從而選擇適合用于洗脫的有機(jī)流動相,確定方法開發(fā)時是用正相色譜柱還是反向色譜柱,。
3. 在總量為m樣品中加入質(zhì)量為mS的內(nèi)標(biāo)物S,,然后根據(jù)被測物和內(nèi)標(biāo)物的重量以及在色譜圖上相應(yīng)的峰面積比求出某組分i的含量。這種方法不需所有組分都出峰,,操作條件和進(jìn)樣量基本無影響,。
以上步驟完成后,可以進(jìn)一步確定HPLC分析的實(shí)驗(yàn)參數(shù),,包括流動相的組成及其比例,、流速、檢測波長等,。以上條件可根據(jù)文獻(xiàn)資料了解或經(jīng)驗(yàn)總結(jié),,若無相關(guān)經(jīng)驗(yàn)可參考,可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計篩選實(shí)驗(yàn)條件,,通過實(shí)驗(yàn)結(jié)果不斷優(yōu)化分析條件,。同時注意內(nèi)標(biāo)物難找,需要穩(wěn)定無反應(yīng),、結(jié)構(gòu)性能相似,、保留時間內(nèi)插并完全分離。
希望以上HPLC分析條件篩選的步驟對你有所幫助,。