App ID: FLM-S230001

GB 5009.35-2023

食品中合成著色劑固相萃取及檢測

一,、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?

本研究按照 GB5009.35-2023 標(biāo)準(zhǔn),，利用固相萃取法作為樣品的前處理,，建立了固相萃取-高效液相色譜法測定食品中合成著色劑含量的方法,， 樣品經(jīng)乙醇氨水提取后， 經(jīng) Polyclean X-WAX-S

150mg/6ml 小柱凈化,， 采用高效液相色譜儀結(jié)合紫外檢測器測定,。

二、實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)物

糖果等食品中合成著色劑

三,、應(yīng)用范圍

糖果等食品中合成著色劑的前處理與分析。

四,、實(shí)驗(yàn)材料

菲羅門 Polyclean X-WAX-S 小柱, 150mg/6mL(貨號：9B-P008-06150),。

注：乙醇氨水溶液配制，量取無水乙醇 700 mL,，加入 4 mL 氨水,，用水稀釋并定容至 1 L,，混勻。

五,、實(shí)驗(yàn)方法

1,、樣品提取

準(zhǔn)確稱取樣品 2 g（精確至 0.001 g），置于 50 mL 具塞離心管中,，加入 25 mL 乙醇氨水溶液（硬糖需要

先加入 2 mL 水超聲使其溶解）,，渦旋 1 min，50℃超聲提取 20 min,，8000 轉(zhuǎn)/分鐘離心 5 min,。

取上清液置于 50 mL 離心管中，殘?jiān)性偌尤?15 mL 乙醇氨水溶液重復(fù)提取 1 次,，離心后合并上清液,，

用乙醇氨水溶液定容至 50 mL，即得提取液,。

準(zhǔn)確吸取提取液 10 mL,，50℃下氮?dú)鉂饪s至 2 mL 左右，分 2~3 次共加入 10 mL 5%甲醇水溶液溶解,，作為待凈化液,。

2、SPE 柱凈化

先依次用 6 mL 甲醇和 6 mL 水活化 Polyclean X-WAX-S 150mg/6ml 固相萃取柱,，保持柱體濕潤,，將待凈化液注入柱中，控制流出液流速在 1 滴/秒,，棄去流出液,。再依次用 6 mL 2%甲酸水和 6 mL 甲醇淋洗， 棄去淋洗液,，抽干小柱,。

最后用 6 mL 2%氨化甲醇洗脫，分兩次加入,，收集洗脫液,，于 50 ℃氮吹至近干。準(zhǔn)確加入 2 mL pH=9 的乙酸銨溶液溶解,，過 0.45 μm PTFE 濾膜,，棄去 2~5 滴初濾液，取續(xù)濾液作為待測液,。

3,、HPLC 條件

色譜柱：菲羅門 SuperLu C18(2) 5u 250*4.6mm（貨號：FMG-5292-EONU) 流動相：A：20 mmol/L 乙酸銨溶液 B：甲醇

色譜方法：參照 GB 5009.35-2023 標(biāo)準(zhǔn)中一致的方法

六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果參考

七、注意事項(xiàng)

1）在使用乙醇氨水溶液提取時(shí),，需要提取兩次以上,，提取一次可能會導(dǎo)致提取不充分，導(dǎo)致回收率偏低,。

2）過 Polyclean X-WAX-S 小柱前確認(rèn)樣液的 pH 值＜6,，以便于合成著色劑目標(biāo)化合物和填料更好的結(jié)合。

3）上機(jī)之前過濾所用的針式過濾器不能使用尼龍針式過濾器,，會吸附部分合成著色劑,，導(dǎo)致回收率偏低，     建議使用 PTFE 水系針式過濾器,。4）在檢測赤蘚紅時(shí),，需要注意在使用離心管氮吹時(shí)會有少量的赤蘚紅會附著在離心管上，可以采用渦旋和     超聲的方法進(jìn)行溶解,，使用玻璃的氮吹管更易溶解,；或者在溶解的時(shí)候加入一定量的甲醇便于赤蘚紅的溶解。