液相流動(dòng)相調(diào)整原則如下:
1. 由強(qiáng)到弱:一般先用90%的乙腈或甲醇-水或緩沖溶液進(jìn)行試驗(yàn),,可很快得到分離結(jié)果,,然后根據(jù)出峰情況調(diào)整有機(jī)溶劑(乙腈或甲醇)的比例,。
2. 三倍規(guī)則:每減少10%的有機(jī)溶劑(乙腈或甲醇)的量,,保留因子增加約3倍,,此為三倍規(guī)則,。調(diào)整時(shí)注意觀察各個(gè)峰的分離情況,。
3. 粗調(diào)轉(zhuǎn)微調(diào):當(dāng)分離達(dá)到一定程度時(shí),,應(yīng)將有機(jī)溶劑(乙腈或甲醇)10%的改變量調(diào)整為5%,,并據(jù)此規(guī)則逐漸降低調(diào)整率,直至各組分的分離情況不再改變,。
4. 流動(dòng)相應(yīng)不改變填料的任何性質(zhì),。低交聯(lián)度的離子交換樹脂和排阻色譜填料有時(shí)遇到某些有機(jī)相會(huì)溶脹或收縮,從而改變色譜柱填床的性質(zhì),。堿性流動(dòng)相不能用于硅膠柱系統(tǒng),。酸性流動(dòng)相不能用于氧化鋁、氧化鎂等吸附劑的柱系統(tǒng),。
5. 純度,。色譜柱的壽命與大量流動(dòng)相通過有關(guān),特別是當(dāng)溶劑所含雜質(zhì)在柱上積累時(shí),。
6. 必須與檢測(cè)器匹配,。使用UV檢測(cè)器時(shí),所用流動(dòng)相在檢測(cè)波長(zhǎng)下應(yīng)沒有吸收,,或吸收很小,。當(dāng)使用示差折光檢測(cè)器時(shí),應(yīng)選擇折光系數(shù)與樣品差別較大的溶劑作流動(dòng)相,,以提高靈敏度,。