色譜分析中的梯度洗脫是一種常用的洗脫方式,，它可以改善大分子化合物方法的重現(xiàn)性,，并且分離的過(guò)程通常比較快,，效率高而且簡(jiǎn)便,。

梯度洗脫主要分為線性梯度、曲線梯度和分段梯度,，其中線性和分段梯度應(yīng)用最廣,。

以下是使用梯度洗脫的常見(jiàn)原因：

1. 樣品極性范圍較大，具有較寬的K值范圍,。這超出了等度洗脫的優(yōu)先目標(biāo)范圍（1≤k≤20）,，若采用等度洗脫可能會(huì)導(dǎo)致樣品運(yùn)行時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，分離度不夠或目標(biāo)化合物殘留未洗脫下來(lái)等問(wèn)題,。若采用梯度洗脫,，則可以大大縮短方法的運(yùn)行時(shí)間，提高分離效果,，避免殘留問(wèn)題的發(fā)生等,。
2. 樣品中含有晚出峰的干擾物，會(huì)污染色譜柱或者是在后續(xù)運(yùn)行中才洗脫出來(lái),；此外,，樣品中若含有極性大的化合物，在等度洗脫的時(shí)候也可能會(huì)干擾樣品中前端出峰的目標(biāo)化合物的分離,。采用梯度洗脫往往就能夠得到更好的分離,，而可以省去樣品處理的過(guò)程。

對(duì)于一個(gè)未知樣品,，通常反相色譜條件最初的流動(dòng)相梯度會(huì)參照如下方法進(jìn)行設(shè)置,。如果在上述條件下，30分鐘之后還有化合物被洗脫下來(lái),，則需要考慮更換保留能力更弱的固定相,，或更換洗脫能力更強(qiáng)的有機(jī)溶劑，重新進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。