層析柱上樣量的確定主要由柱體積和所使用填料的載量來決定。

1. 柱體積（CV）：指的是層析柱中裝填的填料的總體積,，這可以通過層析柱的截面積及填料裝填的高度來計算得到,。
2. 載量：填料在一定條件下結(jié)合目的分子的能力，這分為靜態(tài)載量和動態(tài)載量,。靜態(tài)載量（有效載量）是在一定的條件下,，可以結(jié)合在層析填料上的真實樣品的數(shù)量。這個數(shù)值是通過使用真實的樣品和介質(zhì)充分浸潤飽和后,，測定結(jié)合在填料上的樣品總量得到的,。這個數(shù)值會受到pH、離子強度,、添加劑以及樣品等因素的影響,，實驗條件改變，有效結(jié)合載量也會變化,。動態(tài)載量則是在一定的運行條件下,，可以結(jié)合在層析柱上的樣品數(shù)量。除了pH,、離子強度,、添加劑以及樣品,，運行流速也會影響動態(tài)結(jié)合載量。一般來說,，流速越低,，動態(tài)結(jié)合載量越高。如果流速接近于零,，動態(tài)結(jié)合載量等于有效載量,。

在實際操作中，可以根據(jù)填料的動態(tài)載量來確定上樣量,。對于凝膠過濾層析,，上樣量通常在柱床體積的5%以內(nèi)，根據(jù)樣品的性質(zhì)在0.5%\~5%之間適當調(diào)整,。對于離子交換/疏水層析,，在捕獲及粗純階段，上樣量建議控制在柱吸附量（填料載量×柱床體積）的30%左右,，最高不超過50%,；在精純階段，上樣量建議在柱吸附量的60%左右,，最高不超過80%。