EDTA(乙二胺四乙酸)與DTPA(二乙烯三胺五乙酸)HPLC直接分離分享
EDTA DTPA
根據(jù)樣品分子結(jié)構(gòu)式可知,,EDTA包含兩個氨基(-NH)和四個羧基(-COOH),而DTPA比EDTA多了一個氨基(-NH)和一個羧基(-COOH),。EDTA和DTPA具有多個羧酸基團(tuán)使其具有強(qiáng)酸性,,而氨基則賦予其弱堿性,,由于羧酸基團(tuán)比氨基數(shù)量多,,因此EDTA和DTPA在溶液中主要表現(xiàn)為酸性,。
EDTA和DTPA是市面上常見的螯合劑,部分溶于水,,需要借助其螯合作用加入“NaOH”助溶,使其鈉鹽的形式存在,。
考慮以上兩個化合物,,同時存在酸、堿基團(tuán),,且極性較大,。我們考慮采用同時具有“陰陽離子交換(陽陰離子排斥)+Hilic”作用能力的Comixsil ACRP色譜柱(嵌入了陰離子與陽離子的親水短鏈烷基鍵合硅膠柱)進(jìn)行分析。
色譜柱
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Comixsil ACRP 5μ 250*4.6mm(貨號:FMG-ACRP-EONU)
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檢測器條件
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ELSD,,40℃;2.5L/min
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流速
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1.0ml/min
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柱溫
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25℃
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進(jìn)樣體積
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10μl
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樣品配置
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1. 稱取EDTA 3.2mg 加入1ml(70℃)超純水溶解,,再加入50μl 1MNaOH混勻過0.22μm濾膜,。
2. 稱取DTPA 2.2mg 加入1ml(70℃)超純水溶解,再加入50μl 1MNaOH混勻,,再超聲5min過0.22μm濾膜,。
3. 混標(biāo)用移液槍吸取EDTA與DTPA過濾液各200μl等比例混勻,即可,。
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流動相
T(min)
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100mM 甲酸銨溶液(pH 4)
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乙腈
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25
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25
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75
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色譜圖:
Comixsil ACRP 5μ 250*4.6mm
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空白對照色譜圖(0.05M
NaOH)
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EDTA樣品色譜圖
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DTPA樣品色譜圖
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混標(biāo)色譜圖
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空白對照與EDTA,、DTPA和混標(biāo)對比圖
結(jié)果分析:
使用Comixsil ACRP 5μ 250*4.6mm色譜柱進(jìn)行實(shí)驗(yàn),由色譜圖可見,,分離度分別為7.9與7.8,,分離情況良好,且理論塔板數(shù)>5000(在10000左右),,要縮短時間,,也可嘗試本款柱子的其他規(guī)格(如Comixsil ACRP 3μ 150*4.6mm, 貨號:FMF-ACRP3-EONU)進(jìn)行改善。同時該方法也可用于CAD, MS檢測器,。
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