火腿中胭脂紅和誘惑紅檢測(cè)的固相萃取方法             
  (菲羅門(mén)專用的食品中色素提取分析 Polyclean X-PAmide 小柱)

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>

本研究利用固相萃取法作為樣品的前處理方法,，HPLC 法作為分析方法,，檢測(cè)火腿中胭脂紅和誘惑紅的含量,。
該方法可簡(jiǎn)化樣品的前處理過(guò)程，節(jié)省有機(jī)溶劑的使用,，操作簡(jiǎn)便,。

二、實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)物

胭脂紅(CAS:569-64-2),，誘惑紅(CAS: 25956-17-6),。

三,、應(yīng)用范圍

本方法適用于火腿或者豬肉中多種合成著色劑的檢測(cè)的 HPLC 檢測(cè)及確證。

四,、實(shí)驗(yàn)材料

NuAnalytical Polyclean X-PAmide 小柱 500mg/6mL(9B-P006-06500),。

五、實(shí)驗(yàn)方法
1,、樣品提取

準(zhǔn)確稱取粉碎好的火腿 10.0 g 于 50 mL 離心管中,，加入 30 mL 氨化乙醇溶液（氨水：乙醇：水=20:70:10），  渦旋 1 min,，4000 r/min 離心 5 min,，上清液轉(zhuǎn)移至 100 mL 雞心瓶中,50 ℃ 旋蒸至 2 mL 左右（注意容易暴沸）,，轉(zhuǎn)移至 15 mL 離心管中，加入水至 10 mL,。樣品溶液待凈化,。

2、SPE 柱凈化

(1)活化：Polyclean X-PAmide 小柱使用前用 6 mL 甲醇,、6 mL 水活化。（使用固相萃取裝置,，流速 1-2 滴/秒,。）

(2)上樣和洗脫：在 Polyclean X-PAmide 小柱上加入 10 mL 待凈化樣品，控制流速在 1-2 滴/秒,，棄去流出液,。依次用 6 mL 甲醇,、6 mL 水淋洗，棄去流出液,，抽干,。然后用 6 mL 5%

氨化甲醇進(jìn)行洗脫，控制流速在 1-2 滴/秒,，收集洗脫液,。

(3)重新溶解：洗脫液于 45 ℃氮吹至干,，加 1 mL 水定容，混勻,，過(guò) 0.45 μm 水系濾膜（注意防止不合適的濾膜吸附一定量的色素而造成損失）,，待上機(jī)測(cè)試。

3,、HPLC 條件

設(shè)     備：Waters Alliance 2690

色譜柱 ：Neptune C18 (4.6×250 mm, 5 μm) 檢測(cè)器 ：Waters 2487 紫外檢測(cè)器

流動(dòng)相：A：甲醇         B：0.02mol/L 乙酸銨緩沖溶液洗脫方式：梯度洗脫

表 1 梯度洗脫條件

時(shí)間/min	A%	B%
--	5	95
3	20	80
10.00	60	40
13.00	60	40
15.00	5	95
18.00	5	95

流速：1.0 mL/min 檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm 進(jìn)樣體積：20 μL 六,、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1、0.2 mg/kg 火腿中胭脂紅和誘惑紅的添加回收結(jié)果

表 2   0.2 mg/kg 火腿中胭脂紅和誘惑紅的添加回收結(jié)果