本研究利用固相萃取作為樣品前處理方法,，HPLC 作為分析方法，檢測牛奶樣品中的氯霉素殘留水平,。該方法操作簡便,，可簡化樣品前處理過程,，減少有機(jī)溶劑的使用。

二,、實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)物

氯霉素(CAS:56-75-7)

三,、應(yīng)用范圍

本方法適用于動物源性食品中氯霉素的檢測的 HPLC 檢測及確證。

四,、參考標(biāo)準(zhǔn)

《GB/T 22338-2008 動物源食品中氯霉素類藥物殘留量測定》

五,、實(shí)驗(yàn)材料

NuAnalytical SuperClean C18 固相萃取柱 500mg/6mL,。

六、實(shí)驗(yàn)方法

1,、 樣品待測溶液制備

準(zhǔn)確稱取牛奶 5 g(精確到 0.001 g),，加入乙酸乙酯 15 mL，渦旋振蕩 1 min,，搖床振蕩10 min,。3000 r/min 轉(zhuǎn)速離心 10 min。將上清液轉(zhuǎn)移至試管中,，于 45  ℃氮吹吹干,，用 5 mL乙腈-水溶液(5:95, v/v)溶解，待凈化,。

2,、活化

依次用 5  mL 甲醇和 5  mL 水活化。

3,、上樣和洗脫

將待凈化液加入已活化好的固相萃取柱中,，以 1  mL/min 的流速過柱，棄去濾液,。用 2×4 mL 乙腈-水溶液(5:95, v/v)淋洗固相萃取柱,，棄去淋洗液，抽干 10 min,。用 8 mL 乙酸乙酯洗脫固相萃取柱,，收集洗脫液。

4,、重新溶解

洗脫液于 45 ℃氮?dú)獯蹈?，?1 mL 乙腈-水溶液(2:8, v/v)定溶，0.22 μm 微孔濾膜過濾,， 供 HPLC 測定,。

5、HPLC 條件

色譜柱：SuperLu C18 (250×4.6mm,，5μm)

檢測器：UV@268 nm

流動相：A:水      B:甲醇

洗脫方式：等度洗脫,，A:B=40 : 60

柱溫：室溫    

 流速：1.0 mL/min            

進(jìn)樣量：20μL

七、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1,、牛奶基質(zhì)中氯霉素的 0.5mg/kg 添加回收結(jié)果

 2,、添加水平為 0.5mg/kg 牛奶基質(zhì)中氯霉素檢測色譜圖