本研究利用固相萃取法作為樣品前處理方法，HPLC 法作為檢測(cè)手段,。該方法操作方便,， 可簡(jiǎn)化樣品的前處理過(guò)程，節(jié)省有機(jī)溶劑的使用,。

二,、實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)物

氫化可的松(CAS:50-23-7)

三、應(yīng)用范圍

本方法適用于牛奶中氫化可的松的檢測(cè)及確證,。

四,、實(shí)驗(yàn)材料

NuAnalytical SuperClean Silica 固相萃取柱 500 mg/6 mL。

1,、 樣品待測(cè)溶液制

稱(chēng)取牛奶試料 5 g 于 50 mL 離心管中,，加 30 mL 乙酸乙酯，均質(zhì) 1 min,，350 r/min 搖床振動(dòng) 20 min,，4200 r/min 離心 10 min，移取乙酸乙酯層,。殘?jiān)屑右宜嵋阴?25 mL,，均質(zhì) 1 min， 350 r/min 搖床振動(dòng) 20 min,，4200 r/min 離心 10 min,，移取乙酸乙酯層。合并兩次提取液,，40  ℃旋轉(zhuǎn)至近干,，加乙酸乙酯 1 mL 和正己烷 5 mL，溶解殘?jiān)?，待凈化?/span>

2,、活化

用 6  mL 正己烷活化Silica 固相萃取柱。

3,、上樣和洗脫

取待測(cè)液,，通過(guò) Silica 固相萃取小柱富集，棄去流出液,。用 6 mL 正己烷淋洗固相萃取柱,，真空抽干 5 min,，棄去流出液。用 6 mL 正己烷-丙酮(6:4, v/v)洗脫萃取柱,，收集洗脫液,。

4、重新溶解

洗脫液于 40  ℃氮?dú)獯蹈?，?20%乙腈水溶液 2.0 mL 溶解殘余物,，過(guò) 0.22 μm 濾膜，供HPLC 測(cè)定,。

5,、HPLC 條件

色譜柱：SuperLu C18 (250×4.6mm，5μm)

檢測(cè)器：UV@254 nm

流動(dòng)相：A：乙腈    B：0.1%甲酸水溶液

柱溫：室溫         

流速：1.0 mL/min             

進(jìn)樣量：20 μL

洗脫方式：梯度洗脫,，洗脫程序如下：

 六,、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

 1、 牛奶中氫化可的松的 1mg/kg 添加回收結(jié)果

2,、添加水平為 1mg/kg 牛奶中氫化可的松檢測(cè)色譜圖

 圖 1    添加水平為 1mg/kg 牛奶中氫化可的松檢測(cè)色譜圖